桑黄多酚类化合物的成分鉴定及其抗肿瘤作用机制研究

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桑黄(Phellinus baumii)是一种珍贵的传统中药材,由桑黄真菌寄生于桑树而得名。桑黄富含多糖、多酚、萜类、类固醇等活性成分,现代药理学研究证实其具有抗氧化、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、降血糖、护肝等多种药理作用。许多研究表明多酚类物质具有丰富的药理活性,研究桑黄多酚类物质的组分和抗肿瘤活性,对于桑黄多酚作为抗肿瘤药物开发,具有重要意义。本论文进行桑黄多酚提取纯化、组分鉴定、体外抗肿瘤作用及其机制等研究,主要研究结果如下:(1)采用超声辅助乙醇回流法提取桑黄多酚,使用大孔树脂柱对桑黄多酚粗提物进行纯化,得到高纯度(94.47±4.10%)的桑黄多酚(PBP)。采用液质联用UPLC-ESI-QTOF-MS技术并结合PeakView软件分析,对桑黄多酚组分进行鉴定,结果从PBP中共鉴定出咖啡酸、原儿茶醛、紫萁酮等17种化合物,并解析出这17种化合物的化学结构,同时分析出PBP中的一个代表性组分Interfungin B的二级质谱及其可能的裂解途径。研究结果为桑黄多酚的药理作用研究奠定了基础。(2)采用CCK-8实验测定桑黄多酚(PBP)对人肺腺癌细胞A549、人结直肠癌细胞HCT116、人肝癌细胞HepG2、人宫颈癌细胞HeLa、人膀胱癌细胞T24和人胚肾细胞HEK293的毒性作用,并在相差显微镜下观察PBP对肿瘤细胞生长状态的影响。结果表明,PBP对供试的5种肿瘤细胞的活性均具有很强的体外抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性,其中对A549和HCT116细胞增殖的抑制作用最强(半数致死浓度IC50分别为49.1±0.5 μg/mL和54.2± 0.7 μg/mL),但在101.3-101.9μg/mL浓度下对正常细胞HEK293未见明显的毒性作用;PBP以剂量依赖性使A549和HCT116细胞发生剧烈和不利的形态变化,出现凋亡特征性的细胞形态。(3)以A549和HCT116细胞为实验对象,采用流式细胞分析技术,测定桑黄多酚(PBP)处理细胞的细胞凋亡、细胞周期、细胞活性氧和线粒体膜电位变化情况。结果表明,PBP能够诱导A549和HCT116细胞发生凋亡,引起A549和HCT116细胞的S期阻滞,显著提高A549和HCT116细胞的活性氧水平,并诱导其线粒体去极化,这些均可能是PBP抑制A549细胞和HCT116细胞增殖的有效途径。研究结果为桑黄多酚作为抗肿瘤药物开发提供了理论依据。
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