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选择合适的筛选剂及抗生素种类和浓度是利用农杆菌介导转化法进行植物基因工程研究获得转化植株以及较高转化植株的一个重要前提。以麻疯树的子叶、真叶、根及其对应的愈伤组织作为实验材料,研究各种抗生素对其生长的影响。在MS培养基中添加不同浓度和不同种类的抗生素,比较其对麻疯树不同外植体及对应愈伤组织生长的影响。方差分析和总体观察的结果表明,用于筛选转化植株的最佳抗生素是卡那霉素,其最佳抗性筛选浓度应该为10-25mg/L。氨苄青霉素和特美汀是两种抑菌性抗生素,一般的使用浓度为500mg/L,不同菌株有定的差异,使用原则是达到抑菌目的的同时使抗生素对植物愈伤组织形成和分化的影响最少,即尽量降低其浓度。综合分析,本实验中,氨苄青霉素对麻疯树外植体的生长影响较小,实际还需要考虑抑菌效果。
为了构建麻疯树的遗传转化体系,首先应建立其高频再生和高效转化系统,而瞬时表达测试是优化转化系统条件的快速有效的方法。影响瞬时表达的因素很多,本实验主要对四个因素进行测试:预培养天数(1天、2天)、不同激素配比的分化培养(IBA1.0mg/L+BA0.4mg/L、IBA0.2mg/L+BA2mg/L)、是否加入乙酰丁香酮(+AS、-AS)、外植体类型(子叶、真叶、下胚轴、根)。瞬时表达率=有gus基因瞬时表达的外植体个数/总外植体数,综合外植体瞬时表达的程度,最后得出初步结论:麻疯树(培养35天左右)子叶在分化培养基(IBA1mg/L,BA0.4mg/L)上预培养2天,并且在预培养基和离心后的MS0农杆菌菌液中加入AS,最后得到的瞬时表达效率较高(60%)。在染色观察过程中,发现有些部分染色比较深,有的较浅,推测这与T-DNA整合的程度有关。