Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）是一种胰岛素分泌和胰岛素活性紊乱引起的长期代谢失调的疾病。沙格列汀作为二肽基肽酶-4（DPP-4）抑制剂,属于肠促胰岛素,是首个被我国批准具有单药和联合用药治疗T2DM双适应症的DPP-4抑制剂。沙格列汀虽然上市略晚,但由于其剂量小即可获得治疗效果且不良反应较少,得到医生患者的青睐,具有良好的研发前景。本文对沙格列汀潜在杂质进行相关研究,运用高效液相色谱法和气相色谱法对沙格列汀的异构体、有关物质、残留溶剂以及基因毒性杂质进行研究与控制。采用QbD的指导思想对检测方法的前期开发进行了详细的设计研究,确定检测方法中的关键参数,并对这4种方法进行了详细的方法学验证工作,确保检测方法准确可靠。本论文主要由以下五部分组成:第一部分介绍了该课题的背景和意义,包括Ⅱ型糖尿病发病机制及药物研究进展、沙格列汀作用机制及市场销售情况、高效液相色谱法的基本原理、QbD的起源及其在液相色谱法开发中的应用。第二部分的工作主要建立了正相液相色谱法控制沙格列汀的对映异构体（即杂质1）。由于无相关药典质量标准作为参考,该方法以起始物料作为方法建立依据,运用QbD理念,在方法开发初期对流动相、色谱柱以及供试品浓度做相应的研究选择,最终以直链淀粉-三（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）柱为分离柱,以正己烷-异丙醇-甲醇-二乙胺（65:20:15:0.1）为流动相,不仅实现了杂质1与沙格列汀以及其他杂质的有效分离,同时保证了正己烷与甲醇的互溶性。杂质1的检测限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分别为0.50μg/ml和1.00μg/ml;线性方程为A=8 075.5c-1 611.8,r=0.999 9,线性关系良好;杂质1对照品峰面积的RSD（n=6）为0.38%,系统精密度良好;样品加标回收率在101.0%～107.0%之间,RSD（n=9）为2.6%;供试品于室温放置12 h内能稳定存在。3批沙格列汀原料药按该方法检测,均未检出杂质1。该方法操作简单,分离度佳,有较好的重现性,结果准确可靠。第三部分的工作主要是建立了反相液相色谱法控制沙格列汀的杂质2～6。该方法以进口药品注册标准为参考依据,运用QbD理念,根据自研产品特性,对流动相、洗脱方式、色谱柱以及溶解溶剂进行了相应的优化。以十八烷基硅烷键合硅胶柱作为分离柱,以乙腈-水-磷酸为流动相进行梯度洗脱,实现了杂质2～6的有效分离。各杂质的检测限（S/N=3）分别为0.16μg/ml、0.12μg/ml、0.12μg/ml、0.10μg/ml、0.10μg/ml,定量限（S/N=10）分别为0.36μg/ml、0.40μg/ml、0.40μg/ml、0.19μg/ml、0.20μg/ml,线性关系良好;各杂质的校正因子分别为1.39、0.59、0.98、1.44、1.31;杂质2～6对照品峰面积的RSD（n=6）在0.20%～1.20%之间,系统精密度良好;样品加标回收率在98.0%～104.0%之间,RSD在1.9%～4.0%之间;考察微小色谱条件参数变化,各杂质的分离度满足要求,方法耐用性良好。3批沙格列汀原料药按该方法检测,杂质3含量分别为0.06%、0.09%和0.08%,杂质2、4、5、6均未检出。该方法简单方便,灵敏度高,准确可靠,但由于杂质5、6易降解,因此供试品需新鲜配制或保存在低温进样室（5℃）中。第四部分的工作主要是建立气相色谱法对沙格列汀的残留溶剂进行控制。根据中国药典2015年版四部通则中气相色谱法以及残留溶剂测定的相关规定,对沙格列汀工艺路线中采用的9种有机溶剂进行控制。以6%氰丙基苯94%二甲基硅氧烷作为分离柱,分别对顶空条件、升温程序以及柱温进行相应的选择和优化,实现9种有机溶剂的有效分离。各有机溶剂的检测限（S/N=3）分别为0.295μg/ml、0.497μg/ml、0.088μg/ml、0.320μg/ml、0.200μg/ml、0.072μg/ml、0.086μg/ml、2.718μg/ml、0.067μg/ml,定量限（S/N=10）分别为1.970μg/ml、0.995μg/ml、4.383μg/ml、0.800μg/ml、0.333μg/ml、0.144μg/ml、0.171μg/ml、13.590μg/ml、0.166μg/ml,线性关系良好;9种有机溶剂的对照品峰面积的RSD（n=6）在1.6%～3.6%之间,系统精密度良好;样品加标回收率在96.0%～109.0%之间,RSD在0.3%～10.2%之间;考察微小色谱条件参数变化,各杂质的分离度满足要求,方法耐用性良好。3批沙格列汀原料药按该方法检测,二氯甲烷含量分别为0.01%、0.01%和0.03%,乙酸乙酯含量分别为0.31%、0.11%和0.38%,其他有机溶剂均未检出。该方法简单方便,灵敏度高,准确可靠。第五部分的工作主要是建立气相色谱法对沙格列汀基因毒性杂质进行控制。基因毒性杂质是近年来原料药杂质研究的一个热点工作,由于沙格列汀合成路线中使用到甲烷磺酸以及甲醇、异丙醇,可产生甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯,这三种溶剂已被明确证明具有基因毒性,因此对该三种溶剂的控制是非常必要的。本实验参考毒理学关注阈值来评估原料药中的基因毒杂质限度,以1.5μg/day作为可接受阈值,同时根据沙格列汀推荐剂量5 mg/day,将这三种基因毒杂质的限度定为0.03%。以6%氰丙基苯94%二甲基硅氧烷作为分离柱,采用直接进样的方式在保证检测方法灵敏度的同时,实现基因毒杂质的有效分离。各基因毒杂质的检测限（S/N=3）分别为0.0012μg/ml、0.0005μg/ml、0.0006μg/ml,定量限（S/N=10）分别为0.003μg/ml、0.001μg/ml、0.0012μg/ml,线性关系良好;对照品以及供试品溶液在室温下,10小时内能保持稳定存在。3批沙格列汀原料药按该方法检测,3种基因毒杂质均未检出。该方法简单方便,灵敏度高。本文在进口药品注册标准的基础上建立了异构体即杂质1的检测方法,此方法在任何文献中都尚未有提及,对近年来热门的基因毒杂质予以关注以及研究控制,并对已有的有关物质检测方法进行了相应优化,完善了沙格列汀杂质检测方法。沙格列汀制剂的市场份额正在逐渐增大,杂质测定方法的进一步优化为其原料药以及制剂的研发工作提供了可靠的杂质控制手段。