为研究Apoptin在肿瘤细胞和正常细胞中亚细胞定位的机理,首先考察了带有增强型绿色荧光蛋白标签的Apoptin在各种不同肿瘤细胞和正常细胞中的亚细胞定位.为研究Apoptin在肿瘤细胞中核定位的机制,通过生物信息学分析预测了Apoptin的核定位信号.在此基础上构建了一系列核定位信号突变体,以EGFP作标签,通过荧光观察分析Apoptin及其突变体的亚细胞定位.通过生物信息学分析发现Apoptin还含有一个可能的核外运信号.为了确定Apoptin的pNES是否具有核外运功能,采用核外运特异性抑制剂leptomycin B(LMB)处理大鼠原代肝细胞.另外,实验中还发现Apoptin的pNES决定了Apoptin在细胞中形成聚合体的能力.Apoptin的pNES缺失体在细胞中几乎不能形成明显的积聚体.而在大肠杆菌中表达的Apoptin的pNES缺失体其形成包涵体的能力也明显降低,几乎全部以可溶性的形式存在.与此对照的是,在大肠杆菌中表达的野生型Apoptin则主要以包涵体的形式存在,并且其变性和复性均较困难.鉴于包涵体的形成常常与蛋白质的积聚倾向有密切的关系.上述结果说明Apoptin的pNES对于Apoptin积聚体的形成是有重要贡献的.重组表达的pNES缺失体,不能形成双体分子,而野生型Apoptin可以形成双体,这进一步说明pNES对Apoptin聚合体的形成是必需的.此外,采用金属离子螯合柱辅助复性技术解决了重组Apoptin复性难的问题.研究还发现在大肠杆菌中表达的Apoptin经体外复性后以单体或二聚体的形式存在,并不形成多聚体,这与文献报道的结果不同.文献报道体外复性的Apoptin形成30~40亚单位组成的多聚体.总之,该研究发现了Apoptin的双组分核定位信号,证明了该双组分核定位信号不具有肿瘤细胞特异性,不受磷酸化作用调控.Apoptin的肿瘤细胞特异性核定位依赖于其pNES和NLS的同时存在.Apoptin的N端1-46氨基酸包含细胞质滞留信号.Apoptin在正常细胞中的细胞质定位是由于其胞质滞留作用和核转位过程平衡的结果.Apoptin多聚体的形成是通过其pNES介导的,pNES对Apoptin聚合体的形成以及其在正常细胞中的细胞质滞留都是必需的.