Rac1/Cdc42的效应子PAK被不同的信号级联反应活化,包括酪氨酸激酶受体和integrins受体,并且它也调控着大量的生物学过程,如细胞增殖和细胞迁移等。PAK的活化曾被报道对RAF-MEK-MAPK信号通路的最大活化是必须的,可能是因为PAK能够同时活化RAF和MEK的缘故。在本论文中,我们证实了起初被鉴定为A-RAF激酶特异负调节子的TH1在细胞中也和PAK1有相互作用。荧光共聚焦显微镜分析显示TH1和PAK1在细胞核和胞浆中都有共定位,这种现象和我们目前的结果相一致。GST pull-down和免疫共沉淀实验证实了TH1和PAK1能直接相互作用,并且选择性的结合到PAK1 C端的激酶域上。TH1和PAK1结合的能力随着PAK1的活化而增强。和PAK1的这种结合形式暗示了他们间的相互作用部分是被PAK1激酶活性所调控的。正如体外激酶活性分析和Western Blot检测所显示的,TH1抑制了PAK1激酶活性并且负调节了MAPK信号的传导。有趣的是,TH1在体内和体外都和MEK1/ERK结合,但并不直接抑制他们的激酶活性。此外,我们还观察到TH1定位于迁移细胞前沿的粘附斑和纤维伪足上,并且通过影响肌动蛋白和粘附动力学变化干扰了细胞的迁移。基于这些实验数据,我们提出了一个模型:TH1和PAK1相互作用,并通过MAPK通路的上游特异地限制了MAPK模块的活化,从而影响了细胞的迁移。