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目的验证瘢痕疙瘩成纤维细胞中是否存在钙/钙调蛋白依耐性丝氨酸蛋白激酶(CASK)和分化抑制因子1(Id1)的异常表达及天然结合,观察青蒿琥酯对二者的影响。为成纤维细胞增殖与调控机理的研究提供实验依据,为青蒿素类药物在瘢痕防治领域的临床应用提供理论指导。方法(1)收集患者手术切除的标本并行体外培养,实验用3-8代细胞。(2)HE染色鉴定成纤维细胞类型,免疫荧光观察2种成纤维细中CASK和Id1的表达,免疫沉淀验证瘢痕疙瘩Fb中CASK和Id1蛋白的天然结合。(3)用不同浓度青蒿琥酯10,30,50,80,120mg/L作用于瘢痕疙瘩成纤维细胞,通过噻唑蓝比色法(MTT)确定药物的半数抑制浓度(IC50),并作为药物干预浓度。(4)实验设正常对照组、瘢痕对照组及瘢痕给药组,通过流式细胞术检测青蒿琥酯干预前后成纤维细胞周期和凋亡的变化,RT-PCR、蛋白印迹法检测各组成纤维细胞中CASK和Id1的核酸与蛋白表达情况。结果(1)成功培养瘢痕疙瘩和正常皮肤组织样本各6例,2种成纤维细胞中均存在CASK和Id1表达,免疫沉淀结果显示CASK沉淀物中能检测到Id1,Id1沉淀物中能检测到CASK,CASK和Id1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中存在天然结合。(2)选择75mg/L为青蒿琥酯干预浓度。G0/G1期和G2/M期的细胞百分比3组之间比较,差异有统计学意义(F=118.064、163.840,P值均小于0.05)。其中瘢痕给药组G0/G1期为(91.4±1.4)%,明显高于瘢痕对照组的(80.7±0.3)%和正常对照组的(82.47±0.6)%(t值分别为12.740、9.872,P值均小于0.05);G2/M期为(6.9±0.3)%,明显低于瘢痕对照组的(13.7±0.3)%和正常对照组的(12.7±0.8)%(t值分别为43.702、12.276,P值均小于0.05)。(4)细胞凋亡率3组之间比较,差异均有统计学意义(F=61.879、4710.862,P值均小于0.05)。其中瘢痕给药组早期凋亡率为(7.1±1.0)%,明显高于瘢痕对照组的(2.6±0.4)%和正常对照组的(2.7±0.3)%(t值分别为7.974、7.767,P值均小于0.05);晚期凋亡率为(14.97±0.3)%,明显高于瘢痕对照组的(2.3±0.3)%和正常对照组的(2.5±0.4)%(t值分别为72.882、69.792,P值均小于0.05)。(3)瘢痕对照组CASK核酸表达量为0.658±0.024,低于正常对照组的1.076±0.008(t=28.997,P<0.05);瘢痕给药组的表达量为0.855±0.008,较瘢痕对照组上升(t=13.549,P<0.05)。瘢痕对照组CASK蛋白表达量为0.067±0.007,低于正常对照组的0.179±0.015(t=12.042,P<0.05);瘢痕给药组为0.132±0.010,较瘢痕对照组上升(t=9.498,P<0.05)。(4)瘢痕对照组Id1mRNA的表达量为0.416±0.006,高于正常对照组的0.317±0.020(t=8.299,P<0.05);瘢痕给药组为0.217±0.009,较瘢痕对照组下降(t=32.417,P<0.05)。瘢痕对照组Id1蛋白的表达量为0.789±0.034,高于正常对照组的0.366±0.029(t=16.341,P<0.05);瘢痕给药组为0.114±0.006,较瘢痕对照组下降(t=33.978,P<0.05)。结论(1)瘢痕疙瘩成纤维细胞中CASK和Id1存在异常表达,这表明其过度增殖可能与二者有关。(2)瘢痕疙瘩成纤维细胞中存在CASK和Id1的天然结合,这表明可能存在CASK/Id1的信号通路参与了成纤维细胞的增殖调控。(3)在一定剂量和时间范围内,青蒿琥酯能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,其机制可能与降低Id1的表达和升高CASK的表达有关。