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沙门菌是导致食源性疾病最重要的病原菌之一,可以感染猪、鸡等食用动物,并通过食物链传递给人类,从而对公共健康造成危害。沙门菌有三千多种血清型,其中肠炎沙门菌血清型分离率最高,家禽是携带肠炎沙门菌最重要的载体之一,一旦发生感染,将造成严重的经济损失。抗生素和疫苗接种是沙门菌防治最重要的手段,近些年,由于抗生素的滥用,导致了非常严重的细菌耐药性,所以抗生素的使用受到了限制,目前市面上主要应用的沙门菌疫苗有灭活苗和减毒苗,但这两种疫苗都有一定局限性,灭活苗无法引起良好的细胞免疫和黏膜免疫,减毒苗容易对免疫力低的鸡造成感染,目前急需开发一种免疫效果好、安全性高、副作用小的疫苗。益生菌的活载体疫苗已被广泛用于对抗动物的微生物感染,并且安全性高。作为食品级益生菌,枯草芽孢杆菌本身具有调节肠道菌群、提高动物生长性能、增强机体免疫力、发酵周期短等优点。它被认为是一种很好的活疫苗载体,作为疫苗载体在预防病毒病、细菌病和寄生虫病等方面已经取得了一定成果。为了提高疫苗的免疫原性,我们选取了4个抗原蛋白（Omp C,Fli C,Sop F,Sse B）,用DNA Star软件对它们进行二级结构、亲水性、柔性区域、表面可及性和抗原指数的预测,同时用在线网站IEDB、SYFPEITHI、Net MHCpan-4.1对它们进行B细胞和T细胞抗原表位的预测,通过分析对比各种预测结果,选择了这四种蛋白T细胞表位集中的部分进行了串联,还在尾部添加了CHIL-18作为免疫佐剂。我们将合成后的基因序列克隆至枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭载体p HT43上,然后用电转的方法将重组表达质粒转化到枯草芽孢杆菌中,成功转化后,通过Western Blot鉴定目的蛋白是否成功表达,结果显示在64kda附近有明显条带,目的蛋白被成功表达。为了进一步评估重组枯草芽孢杆菌的免疫原性,我们选择1日龄SPF雏鸡为实验材料,探究了重组枯草芽孢杆菌对SPF雏鸡的免疫保护效果。随机将80只1日龄的SPF雏鸡分为4组,分别口服免疫相同剂量的PBS、空载枯草芽孢杆菌WB800N-p HT43、重组枯草芽孢杆菌WB800N-p HT43-HA、市售的减毒疫苗Avi Pro Salmonella vac E,在第1-3天进行第一次免疫,每天灌服1 m L(1×1010CFU)的重组枯草芽孢杆菌（PBS）,14-16天进行第二次免疫。在第二次免疫的14天后,采集外周血、空肠灌洗液、气管冲洗液、脾脏（每组6只）,通过间接ELISA方法检测血清特异性抗体Ig G和黏膜特异性抗体s Ig A水平,ELISA方法检测血清细胞因子IL-2和IL-6水平,流式细胞术检测外周血和脾脏CD4+和CD8+水平。同时,随机从每组选出10只小鸡腹腔注射1×LD50的肠炎沙门菌,连续7天统计各组的死亡情况,一周后进行肠道和脾脏的组织病理检测。结果表明,第二次免疫14天后,重组枯草芽孢杆菌组鸡只空肠灌洗液和气管冲洗液的特异性s Ig A水平较其他组显著提高,同时,重组枯草芽孢杆菌组鸡血清中特异性Ig G的水平也显著提高,说明重组枯草芽孢杆菌可以有效诱导黏膜免疫和全身免疫。流式细胞仪结果显示,重组枯草芽孢杆菌组鸡脾脏和外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞的比例显著提高;脾脏淋巴细胞增殖实验结果显示,重组枯草芽孢杆菌可以显著刺激脾脏淋巴细胞增殖,这些结果说明重组枯草芽孢杆菌可以有效诱导细胞免疫。细胞因子方面,重组枯草芽孢杆菌组血清IL-2水平显著提高,IL-6水平显著降低。攻毒后的脾脏、空肠病理分析结果和死亡统计结果显示,重组枯草芽孢杆菌和减毒疫苗均可降低因肠炎沙门菌感染而引起的脾脏和空肠的病理损伤,并降低雏鸡的死亡率。本研究通过对肠炎沙门菌蛋白Omp C、Fli C、Sop F、Sse B进行抗原表位的预测,构建了可以表达Omp C-Fli C-Sop F-Sse B-CHIL-18融合蛋白的枯草芽孢杆菌。研究表明我们构建的重组枯草芽孢杆菌对SPF雏鸡具有良好的免疫保护效果,可以有效诱导体液免疫和细胞免疫。本研究为肠炎沙门菌的活载体疫苗的研究提供了理论数据,为重组枯草芽孢杆菌疫苗的研究提供了技术参考。