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背景:糖尿病伴发的牙周炎现已被公认为糖尿病“第六大”主要并发症,是导致糖尿病患者丢失牙齿的主要原因。西医治疗本病主要是在控制好血糖基础之上,通过去除局部刺激因素,进而控制感染。如龈上洁治术、龈下刮治术、根面平整术等局部治疗技术,虽然技术手段能清除附着于牙体上的菌斑、结石等局部刺激因素,但对器械难以到达的部位以及侵入牙周组织内的致病菌却疗效欠佳。局部或全身应用杀菌剂或抗生素等药物来治疗可产生一定的耐药性、以及诱导二次感染的副作用,故临床疗效不佳。在去除局部刺激因素前提下,经过前人的探讨与研究发现运用中医药治疗本病疗效较佳。目的:观察适宜浓度的补脾益肾方药,是否能降低糖尿病牙周炎人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,HPDLC)微环境中炎性细胞因子,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)以及核因子κB受体活化因子配体(Receptor or Activator of NF-KB Ligand,RANKL)系统的表达,以探寻补脾益肾法干预糖尿病牙周炎的初步作用机制。方法:1.体外分离牙周组织,通过原代和传代培养得到更多的HPDLC,采用免疫组化染色方法(strept avidin-biotin complex,SABC)进行鉴定,然后随机分为实验组和对照组。实验组用不同浓度的补中益气丸和六味地黄丸处理,对照组不做任何处理。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测各组HPDLC增殖的情况。2.用HPDLC构建HPDLC高糖培养体系,随机分为实验组(六味地黄丸组、补中益气丸组、六味地黄丸+补中益气丸组)和对照组(空白组、毒力因子组、高糖组、高糖+毒力因子组)。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)试剂盒检测微环境中炎性细胞因子白介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的表达以及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的浓度。用蛋白印迹(Western blotting,WB)检测微环境中RANKL蛋白和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)蛋白的表达。结果:1.不同浓度的六味地黄丸和补中益气丸对人牙周膜成纤维细胞的增殖无明显影响,最适浓度均为0.01mg/ml;2.六味地黄丸,补中益气丸均能降低糖尿病牙周炎微环境中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的表达;均能下调MMP-2的表达;合用无明显增效作用;3.六味地黄丸,补中益气丸,六味地黄丸+补中益气丸均能降低微环境中RANKL蛋白的表达;均不能增加OPG蛋白的表达;单用六味地黄丸对RANKL系统有抑制作用;单用补中益气丸对RANKL系统无抑制作用;合用对RANKL系统的抑制作用增强。结论:1.0.01mg/ml的六味地黄丸与0.01mg/ml的补中益气丸,对人牙周膜成纤维细胞增殖较为稳定。2.补脾益肾法能降低糖尿病牙周炎微环境中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的表达;能下调MMP-2的表达;能抑制RANKL系统的表达。