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第一部分构建先天性肛门直肠畸形大鼠模型目的:构建全反式维甲酸(ATRA)诱导的先天性肛门直肠畸形SD大鼠模型,获取其不同胚胎时期胎鼠进行骶尾部和肛门发育情况的大体观察,并检测Fibronectin与Lamininβ1在后肠发育过程中表达水平。方法:SD孕鼠随机分为对照组和模型组,每组32只,模型组于E10.5天时予以ATRA(120mg/kg)一次性灌胃,对照组予以等体积(3.6ml/kg)的单纯玉米油灌胃。两组均于E11.5、E12.5、E13.5、E14.5、E15.5、E16.5、E18.5,、E20.5天剖宫取胎鼠,记录获得胎鼠数,采集各时间点胚胎大体图像及测量两组胎鼠的体重、身长、尾长,统计先天性肛门直肠畸形发生率。结果:对照组共取得胎鼠378只,无肛门直肠畸形发生;模型组共取得胎鼠361只。HE染色结果显示对照组胎鼠在E16.5,直肠即与外界相通,形成肛门开口,而模型组胎鼠在E16.5直肠却未能与外界相通,而是形成盲端或者以瘘管形式与腹侧泌尿生殖系相通,肛门直肠畸形发生率99.4%(359/361)。大体图像显示,相比于对照组胎鼠,模型组胎鼠各发育时间点骶尾部均发育异常,表现出无尾(292/361)或短尾(69/361);E18.5和E20.5胎鼠除短尾或无尾表现外,体表未见肛门开口。胎鼠身长、体重、尾长在各发育时间点模型组均滞后于对照组,在E16.5后差异更为显著,经独立样本t检验和U检验,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:在孕期特定时间点予以一次性大剂量ATRA经口灌胃后能够成功诱导SD大鼠子代出现与人类病理类似的先天性肛门直肠畸形类型,为后续实验奠定基础。第二部分Fibronectin和Lamininβ1在先天性肛门直肠畸形大鼠后肠发育的表达目的:利用已经成功构建SD大鼠肛门直肠畸形模型,探究Fibronectin(Fn1)与Lamininβ1(Lamb1)在大鼠胚胎后肠发育过程的表达及意义。方法:对照组与模型组均于E11.5-E16.5、E18.5、E20.5剖宫取胎,收集各发育时间点胎鼠泄殖腔/直肠标本(=32),同时留取全部孕鼠血清。q RT-PCR检测Fn1与Lamb1在对照组及模型组胚胎后肠发育中的m RNA表达水平。Western blot、免疫组织化学进一步检测FN1与LAMB1蛋白的表达情况。结果:Fn1与Lamb1在大鼠胚胎后肠发育中呈连续动态表达。对照组中,q RT-PCR结果显示,Fn1与Lamb1的m RNA表达水平从E11.5天开始逐渐上升,E15.5天时达到顶峰,然后逐渐下降;模型组中,二者各时间点(E20.5天的Lamb1除外)表达量较对照组均明显上调,差异具有显著统计学差异(P<0.05),E11.5天开始上升,到E16.5天达到整个后肠发育过程中的峰值,然后急剧下降,至E20.5天时,Fn1虽显著下降但表达仍高于对照组,Lamb1下降至与对照组同等水平。Western blot结果显示与q RT-PCR结果变化趋势一致,对照组与模型组二者蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组中FN1与LAMB1蛋白在后肠发育过程中E15.5天表达量达到峰值;而模型组中,其表达量不仅上调且峰值延迟,出现于E16.5天。免疫组织化学结果显示FN1与LAMB1的表达量变化趋势与Western blot和q RT-PCR结果一致,对照组中,FN1与LAMB1主要均匀分布于泄殖腔上皮粘膜层和基底膜;而在模型组中,FN1与LAMB1不仅在泄殖腔中呈现出高表达改变,而且在分布上主要集中于尿直肠隔下端而非均匀分布于泄殖腔上皮粘膜层和基底膜层。结论:与对照组相比,ATRA诱导的先天性肛门直肠畸形模型组在胚胎后肠发育过程中Fn1与Lamb1的m RNA与蛋白表达均显著上调、表达峰值延迟、且表达部位紊乱,扰乱了泄殖腔的正常生物学事件发生,可能与先天性肛门直肠畸形发生有关。