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目的：布氏菌病临床诊断试剂盒的基础研究。
方法：采用基因重组技术分别克隆编码布氏杆菌抗原omp10、bp26的DNA片段，继而分别构建原核表达载体PET-30a(+)并转化于大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导各重组蛋白的表达，进一步经包涵体的变性复性、亲和层析法对OMP10、BP26重组蛋白抗原进行纯化，Western-blot检测其抗原性。然后用布氏减毒活疫苗104M、16M死菌液免疫Balb/c小鼠，制备高效价的血清。选抗原性好的BP26重组蛋白作为包被抗原，通过间接ELISA法，检测阳性血清，证实其敏感性和特异性。
结果：
1、通过PCR克隆的BP26、OMP1O蛋白基因均与Genbank中的相应的DNA序列一致。将克隆片段分别插入到表达载体PET-30a(+)上，得到重组质粒；重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中由IPTG诱导表达了BP26、OMP1O蛋白。通过亲和层析方法对重组蛋白BP26进行了纯化，获得了高纯度的重组蛋白；理化特性的研究结果显示：BP26分子量大小为27.8KD，在蛋白梯度纯化图中显示：用100％B洗脱时，该蛋白在280nm附近有最大吸收。经Western-Blot检测表明该重组蛋白具有良好的抗原性。通过对包涵体的变性、复性以及亲和层析等方法对OMP10蛋白进行了纯化，获得了纯度较高的重组蛋白；理化性质的研究结果显示：OMP10分子量为14.2KD，在蛋白梯度纯化图中显示：在20％B、50％B、100％B洗脱时，都能监测到该蛋白在280nm附近的吸收峰。
2、本实验通过小鼠腹股沟皮下注射途径，制备布氏杆菌阳性血清(104M组、M16组)和阴性血清(百白破组、生理盐水组)，通过双向琼脂免疫扩散方法测血清效价，当抗体效价达到1:16或1:32时，即可摘眼球采血，收集血清。用BP26重组蛋白包被抗原，间接ELISA结果P/N比值远高于2.1，说明：布病患者血清、小鼠104M血清、小鼠16M血清和沙林鼠种免兔血清与BP26蛋白特异性结合，敏感度强。此外，用BP26重组蛋白，检测78份正常人血清和34份正常牛血清，阴性符合率分别为93.5％和97％。
结论:所选择的OMP10重组蛋白因为是以包涵体的形式表达，所以在纯化复性的过程中，因为多种原因，使其生物活性丧失，没有良好的抗原性。而BP26重组蛋白能够和本实验中所有的布氏杆菌阳性血清产生特异性的结合，且敏感度强，是布氏杆菌血清学诊断的优势抗原，为布病的临床诊断奠定了基础。