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目的了解青岛地区铜绿假单胞菌临床分离菌株的耐药特征,检测分析金属p-内酰胺酶(MBL)分布和外膜孔蛋白oprD2基因缺失情况,为指导临床合理应用抗菌药物提供实验依据。方法收集2012年1月到2013年1月青岛地区3所三级甲等综合性医院临床分离的非重复铜绿假单胞菌共180株。VITEK2-compact微生物鉴定系统GNI卡进行细菌鉴定试验；K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验；E-test(IPM/EDTA)法进行金属酶表型检测；PCR技术进行金属β-内酰胺酶基因(IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2、 GIM、SPM、SIM、NDM)和外膜孔蛋白oprD2基因检测。结果①180株铜绿假单胞菌中标本类型分布以呼吸道分泌物最多,占81.11%(146/180)。②180株铜绿假单胞菌检出率以ICU病房最高,占总数的50.56%(91/180)；其次为呼吸科病房,占28.89%(52/180)。③180株铜绿假单胞菌中检出多重耐药菌株61株,泛耐药菌株28株,检出率分别为33.89%(61/180)和15.56%(28/180)。铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率分别为60.00%、61.11%和40.00%；对喹诺酮类药物环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为44.44%和53.33%；对磺胺类药物复方新诺明耐药率为98.89%；对青霉素类药物哌拉西林耐药率为85.56%；对p-内酰胺/p-内酰胺酶抑制剂复合物,包括哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为63.89%和28.33%；对头孢类药物,包括头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶以及头孢吡肟的耐药率依次为84.44%、83.33%、81.11%、72.22%、70.00%、49.44%和50.56%；对单环β-内酰胺类药物氨曲南耐药率为52.78%；对碳青霉烯类药物亚胺培南和美洛培南的耐药率分别为38.33%和33.89%；对多粘菌素敏感率为100%。④耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)的分离率为38.3%(69/180),69株IRPA中88.41%(61/69)的菌株为多重耐药菌株；40.58%(28/69)的菌株为泛耐药菌株。IRPA对20种临床常用药物中的16种药物的耐药率均在60%以上,仅对环丙沙星、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦以及多粘菌素B的敏感度较高,其敏感率分别为47.83%、50.72%、62.32%和100.00%,且IRPA对17种药物的耐药率均显著高于ISPA菌株(P<0.05)。⑤亚胺培南耐药组经E-test试验进行金属酶表型筛查有13株金属酶阳性,检出率为18.84%(13/69)；亚胺培南敏感组未检出金属酶阳性菌株,检出率为0.00%(O/111)。亚胺培南耐药组经PCR扩增金属酶基因阳性的有11株,阳性率为15.94%(11/69),其中4株为IMP-1,7株为VIM-2,其他几种基因(IMP-2、VIM-1、SPM、GIM、SIM和NDM)均未检出；亚胺培南敏感组所有菌株各种金属酶基因均未检出。将耐药组与敏感组金属酶表型和基因型阳性菌株的检出率进行比较,耐药组的检出率显著高于敏感组(P<0.05)。⑥亚胺培南耐药组有53株oprD2基因缺失,缺失率为76.81%(53/69)；亚胺培南敏感组有12株oprD2基因缺失,缺失率为10.81%(12/111),耐药组oprD2基因缺失率显著高于敏感组(P<0.05)。结论①本地区铜绿假单胞菌分离菌株主要以引起患者的呼吸系统感染为主。②ICU是本地区铜绿假单胞菌感染的高发区。③本地区铜绿假单胞菌耐药情况严重,尤其是耐亚胺培南铜绿假单胞菌,其对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类等临床常用药物表现为不同程度耐药,仅对环丙沙星、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦以及多粘菌素B较为敏感。针对该菌感染可以选择性使用敏感度比较高的含酶抑制剂类药物头孢哌酮/舒巴坦、氟喹诺酮类药物环丙沙星和氨基糖苷类药物阿米卡星,必要时可在严密监测肾功能的情况下考虑采用多粘菌素治疗。④金属p-内酰胺酶基因的存在和其产生的金属酶是青岛地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一,酶的基因型主要为IMP-1和VIM-2。⑤外膜孔蛋白oprD2缺失推测为青岛地区铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培南耐药的主要原因。