白头翁(Pulsatilla chinensis)对AA肉鸡抗菌促生长作用机理研究

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有研究表明,白头翁(Pulsatilla chinensis)除具有抗菌和抗病原作用外,还具有提高机体免疫力、抑制巨噬细胞分泌、抗癌、抗炎、抗毒、止泻、镇静、镇痛、杀灭滴虫和球虫、抑制肠蠕动、抗内毒素血症等作用。本研究旨在确认白头翁素是白头翁中抗菌主要活性成分,研究白头翁对肉鸡免疫功能、生产性能和生理功能的影响,探讨白头翁促生长作用机理。为进一步开发白头翁作抗菌饲料添加剂应用提供科学依据。试验一水蒸气蒸馏法制备白头翁素。称取适量白头翁,粉碎,加约适量水的水,置40℃水浴锅24 h,用旋转蒸发仪减压蒸馏,收集蒸馏液,冷却,除去浮在上面的不溶性杂质,加氯化钠,用氯仿振萃取,合并提取液,减压蒸去溶剂,遗留灰黄色具有刺激性的油状液体,为粗制原白头翁素,静置数天,重结晶,白头翁素结晶析出。经高效液相色谱和核磁共振分析是白头翁素。试验二白头翁浸膏对血清指标和肉鸡生产性能的影响。用白头翁浸膏作为添加剂,分别选用1日龄健康AA肉雏鸡480只进行42 d的饲养试验,随机分成5组,即基础日粮组(对照);添加白头翁浸膏0.5%组、1%组和2%组;抗生素组。测定不同处理组肉鸡的增重、饲料转化率以及血清生化指标。结果发现:白头翁浸膏能促进肉鸡生长和改善料重比,与对照组相比,2%白头翁浸膏添加组效果最好,42d体重提高了5.42%(P<0.05),饲料转化率改善了5.50%(P<0.05);且提高了肉鸡42d的血清总蛋白和白蛋白含量(P<0.05),T3、T4水平,GOT和GPT略有提高,但差异不显著(P>0.05)。试验三白头翁抗菌作用研究。(1)体外试验:用白头翁水煎液、白头翁素通过牛津杯法作体外的抑菌试验,结果显示:0.5%水煎液、1%水煎液和0.1%白头翁素对大肠杆菌、变形杆菌、阴沟肠杆菌都有抑菌作用,其中0.1 mg/mL白头翁素对大肠杆菌、变形杆菌抑菌圈直径大于0.4 mg/L恩诺沙星。(2)体内试验:用白头翁浸膏作为添加剂进行饲养试验,选用肉鸡及分组同试验一。采用平板计数法统计肉鸡盲肠大肠杆菌和乳酸菌数量,观察白头翁对鸡肠道菌群影响,通过体内外试验验证白头翁素抑菌一致作用。结果显示:在前期不同浓度的白头翁浸膏添加组中大肠杆菌数量的分别比空白组减少2.73%、8.45%和9.94%(P>0.05);后期时白头翁浸膏各组中乳酸菌比空白组有上升的趋势,差异不显著(P>0.05)。试验四白头翁对肉鸡免疫功能的影响。(1)体外试验:采用MTT法比较了100、200、400、800 mg/mL白头翁水蒸馏液对肉鸡脾淋巴细胞增值的影响.结果发现,4种浓度白头翁蒸馏液均能刺激ConA诱导的脾淋巴细胞增殖,400、800 mg/mL浓度组呈显著水平(P<0.05);4种白头翁蒸馏液在对LPS诱导的脾淋巴细胞增殖均有显著增强作用(P<0.05).且增殖作用随白头翁浓度增加而增强。(2)体内试验:用白头翁浸膏作为添加剂进行饲养试验,选用肉鸡及分组同试验一。分别在21、42日龄屠宰取样,计算免疫器官胸腺、脾脏与法氏囊器官指数.结果表明:在前期,与对照组相比,添加0.50%、1%白头翁浸膏组脾脏指数提高12.84%、14.68%(P>0.05),添加0.5%,1%,2%浓度组使肉鸡胸腺指数分别提高了20.98%、1.95%、12.68%(P>0.05),添加0.5%,1%,2%浓度组法氏囊指数分别提高了2.94%,12.41%,6.86%(P>0.05);在后期,与对照组相比,0.5%、1%和2%白头翁浸膏组使肉鸡脾脏指数分别提高了9.65%、14.04%、10.52%(P>0.05),胸腺指数分别提高了7.31%、3.65%,8.68%(P>0.05),法氏囊指数分别提高了47.62%、52.38%和47.62%,差异显著(P<0.05)。试验五白头翁对肉鸡抗氧化功能影响的研究。用白头翁浸膏作为添加剂进行饲养试验,选用肉鸡及分组同试验一。分别在21、42日龄采血,测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性.结果显示:在前期,SOD在白头翁浸膏添加组和对照组之活性没有显著变化(P>0.05),GSH-PX在白头翁浸膏添加各组均高于对照组,2%添加组值达显著水平(P<0.05);在后期,SOD在白头翁浸膏各组值均显著高于对照组(P<0.05),GSH-PX在白头翁浸膏添加各组均高于对照组,但差异不显著(P>0.05).结果显示,白头翁素是白头翁属植物抑菌的主要活性成分,白头翁具有抑制肉鸡大肠杆菌生长、促进乳酸菌生长,能够改善菌群环境的作用;白头翁能提高肉鸡免疫器官生长、延缓淋巴器官退化,白头翁蒸馏液能够刺激ConA或LPS诱导的脾淋巴细胞增殖,且增殖作用随白头翁浓度增加而增强,有增强肉鸡免疫功能作用;白头翁能提高血清中SOD和GSH-PX的活性、提高肉鸡抗氧化能力,减少自由基对组织的损伤,有利于肉鸡的生长发育,提高机体新陈代谢和蛋白质沉积.
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