本研究以人L-型肠内分泌细胞株NCI-H716为研究对象,从细胞功能水平和分子水平深入探讨17β-雌二醇(E2)增强NCI-H716细胞甜味信号转导的机制,为E2影响甜味感知能力、摄食行为和肥胖等研究提供更多的生物学依据。主要内容为:用不同浓度E2(1、10、50、100nM)和甜味剂(蔗糖、AK糖)刺激NCI-H716细胞,采用ATP测试试剂盒和钙流检测技术分别检测胞外ATP的分泌以及胞内Ca2+的释放情况。并采用半定量qRT-PCR方法检测甜味信号传导关键分子(T1R2/T1R3、Gα、PLCβ2和TRPM5)在mRNA水平表达的差异、以及利用Western blotting技术进一步检测甜味信号蛋白(T1R3、PLCβ2和TRPM5)表达情况。实验结果如下:蔗糖单独刺激使胞外ATP分泌与胞内Ca2+释放均增加,而AK糖单独刺激促进胞外ATP分泌,但胞内Ca2+水平未发生显著变化。一定浓度的E2长期(12h)或短期(5min)预处理均可显著增加蔗糖或AK糖诱导的胞外ATP分泌、以及促进蔗糖诱导的胞内Ca2+的释放。该结果提示E2增强了 NCI-H716细胞对甜味刺激的反应,且细胞中蔗糖与AK糖触发的甜味信号转导通路可能存在差异。E2以不同浓度(1,10,50,100 nM)和不同时间(3,12,18,24h)作用于细胞,结果显示:10nM E2孵育12h可显著上调胞内T1R2/T1R3/Gα/PLCβ2/TRPM5的mRNA水平。与甜味剂组相比,10nME2预处理12h对蔗糖诱导的T1R2/PLCβ2以及AK糖诱导Gα/PLCβ2/TRPM5的mRNA表达均有显著促进作用;对蔗糖诱导的T1R3/PLCβ2/TRPM5蛋白表达具有促进作用,对AK糖诱导的甜味信号转导蛋白(T1R3/PLCβ2/TRPM5)表达有所增加,但尚未达到显著性差异。上述结果表明,E2可通过基因组机制以及非基因组机制,增强NCI-H716细胞对甜味刺激的反应,即增强甜味感知能力,且细胞中蔗糖与AK糖触发的甜味信号转导通路可能存在差异。