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1 梅花AFLP体系构建和引物筛选 梅花（Prunus mume,2n=16）属于蔷薇科（Rosaceae）,Prunoidese亚科,李属（Prunus L.）植物,在中国、朝鲜和日本是著名的早春开花的观赏植物。AFLP是目前研究物种遗传变异常用的分子标记之一,它首次应用于梅花种质资源的遗传多样性和亲缘关系的研究。本研究采用EcoR Ⅰ/Pst Ⅰ限制性内切酶组合酶切梅花基因组DNA的AFLP实验流程。从256对AFLP引物中筛选出10对多态性位点最高的引物,这些引物扩增出高的多态性位点在‘雪梅’等14个梅花品种中具有可靠的重复性,共扩增出清晰可记录524个位点,其中233个为多态性位点,多态性位点的百分率从35.71%到59.67%之间不等,平均百分率为44.46%,可用来分析更多梅花品种之间的遗传关系。AFLP是一种效率高、花费适中、节约时间、但操作比较复杂的研究梅花遗传分化的技术。 2 应用AFLP初步探讨梅花品种间的亲缘关系 应用AFLP技术初步研究了1个半野生种,1个杂交子代和18个梅花品种,代表梅花主要类、型,共计20株梅花的亲缘关系,19对选择性引物扩增出清晰的总位点数为918个,其中多态性位点324个,多态性位点百分率为35.29%。采用SAS类平均法聚类分析AFLP数据,λ值为0.9759时,将20株梅花分为四个类群。半野生‘曲梗梅’的多态位点数最高,‘多萼朱砂’、‘复瓣小宫粉’等梅花品种次之。在类群Ⅳ中,具有明显亲缘关系的两组杂交亲本及其子代各自聚为一组,表明AFLP技术和聚类分析方法可以用来研究梅花品种间的亲缘关系。‘小宫粉’、‘江南朱砂’和它们的子代亲缘关系密切,聚类分析结果仍能区别其较小差异,这有助于解决梅花中不同产地相同品种异名和同名而品种不同的情况。垂枝类梅花品种间有较近的亲缘关系或者遗传来源,支持枝姿作为梅花分类的重要形态特征,垂枝类品种属于梅花中比较进化的类群与其历史演化记录相吻合。本研究中所采用的DNA限制性内切酶酶切组合及所筛选的AFLP引物对适合研究梅花品种间的亲缘关系和遗传多样性。 3 AFLP技术对梅花杂交种的快速鉴定 应用银染法AFLP鉴定以父本‘多萼朱砂’与母本‘雪梅’杂交所得12株F1子代。以E-AT/P-AT选择性引物对扩增,父本180bp左右的特异带在12株F1代中都呈阳性带;母本170bp左右的两条特异带在12株F1代中也都呈阳性带,双亲基因组DNA中这3个特异位点在F1子代中稳定遗传。结果表明这12株均为‘多萼朱