北柴胡(Bupleurum chinense DC.)是柴胡药材的基原植物之一。柴胡皂苷是柴胡的主要药效成分,目前已经分离到了柴胡皂苷单体120多种,其中北柴胡中分离到了柴胡皂苷单体20多种,多为齐墩果烷型三萜皂苷和乌苏烷型三萜皂苷,目前研究较多的是柴胡皂苷a、c、d和b。中国药典将柴胡皂苷a和d作为柴胡品质评价的指标。三萜皂苷合成途径主要分为前体形成、骨架构建、后修饰三个过程,受植物生长发育及环境条件影响调控。已有研究表明转录因子参与这一调控过程。课题组前期从北柴胡转录组数据中获得一些转录因子基因的序列,初步分析了这些转录因子基因的组织表达和茉莉酸甲酯诱导表达特性,在此基础上,本研究构建了转录因子基因BcAP2-13过表达的北柴胡毛状根株系,分析了过表达株系的柴胡皂苷含量变化,制备了 BcAP2-13的抗体,以期进一步解析BcAP2-13的生物功能。另外,对前期已获得的BcbZIP134过表达毛状根株系进行了重复功能验证,研究获得如下结果:1、利用烟草叶片的瞬时表达体系,证实了 BcAP2-13基因定位于细胞核中;利用发根农杆菌介导的遗传转化,获得了BcAP2-1 过表达的北柴胡毛状根株系;荧光定量PCR测定表明其中4个株系的BcAP2-13基因表达量较对照显著性提高,同时柴胡皂苷合成途径关键酶基因β-AS的表达量较对照显著性提高,HPLC测定表明,过表达株系的柴胡皂苷a、c和d的含量较对照显著性提高,表明BcAP2-13可能对柴胡皂苷的合成起正调控作用;利用大肠杆菌原核表达方法,获得了 BcAP2-13的体外融合蛋白,随后制备和纯化了多克隆抗体,通过Western Blot初步验证该抗体有效,以用于后续筛选该转录因子调控的靶基因。2、利用LC-MS/MS的方法对BcbZIP134过表达的毛状根株系的柴胡皂苷含量进行了测定,进一步证实了BcbZIP134的过表达降低了柴胡皂苷的合成。