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目的建立快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的实时荧光PCR方法，为临床诊断提供新的实验室依据。方法运用实时荧光PCR，以3组细菌，即耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌的DNA为模板，以nuc基因和mecA基因为靶序列进行扩增，建立运用实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法；再确定运用细菌基因组DNA抽提试剂盒直接从全血中提取细菌DNA的灵敏度；最后从临床或疑似诊断败血症病例中抽取血标本，用细菌基因组DNA抽提试剂盒直接提取细菌DNA，进行实时荧光PCR扩增，结果与常规的细菌检测方法做比较，分析其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果1．实时荧光PCR示，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌组各菌株nuc，mecA均阳性；甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌组各菌株nuc均阳性，mecA均阴性；表皮葡萄球菌组各菌株nuc，mecA均阴性。2．血标本中提取耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA的结果示10-2及其以下稀释度的全血标本都无法用细菌基因组DNA抽提试剂盒提取细菌DNA，而5次平板菌落计数结果分别为3.83×109CFU／ml，4.10×109 CFU／ml，8.37×109 CFU／ml，3.65×109 CFU／ml，5.36×109 CFU／ml，均为109 CFU／ml。即只有当血液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在107CFU／ml及其以上时才能被试剂盒提取细菌DNA。3．临床验证部分，通过对抽取的135例血标本进行实时荧光PCR检测，结果显示nuc阳性的共10份，mecA阳性的共6份。135份血标本血培养阳性的有46份，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阳性13份，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌阳性9份，表皮葡萄球菌阳性10份，其余细菌阳性13份。将血培养耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌阳性的血标本组成4个组，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌为第一组，甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌为第二组，做对照以评价实时荧光PCR扩增mecA基因快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的效应，结果示灵敏度为46.15％（6／13），特异度为100％（9／9），阳性预测值为100％（6／6），阴性预测值为56.25（9／16）％；以金黄色葡萄球菌（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌+甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌）为第三组，表皮葡萄球菌为第四组，做对照以评价实时荧光PCR扩增nuc基因快速检测金黄色葡萄球菌的效应，结果示灵敏度为45.45（10／22）％，特异度为100％（10／10），阳性预测值为100％（10／10），阴性预测值为45.45％（10／22）。结论实时荧光PCR可以快速，准确地检测血标本中的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，但灵敏度有待提高。