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祖师麻是多年生草本植物,《中国药典》(2015版)记载为瑞香科(Thymelaeaceae)植物黄瑞香(Daphne giraldii Nitsche)的干燥茎皮和根皮,性温,味辛苦,有小毒,功效为祛风除湿,散瘀止痛。目前,祖师麻资源被过度采摘,人工栽培发展滞后,已成为一种濒危中药材,本课题组前期普查发现其蕴藏量已不足600吨。因此,为了让有限资源发挥最大的价值,本研究以祖师麻内生真菌为研究对象,利用高通量测序法和单菌落培养法分析内生真菌多样性,利用牛津杯抑菌圈法、双向发酵技术分析内生真菌的功能,为瑞香科植物内生真菌多样性和祖师麻药用价值发挥提供参考。本研究首先通过高通量测序法分析不同产地祖师麻内生真菌的多样性;并采用单菌落分离法分离可培养内生真菌,结合形态学和分子生物学法进行内生真菌菌株的鉴定,为内生真菌的多样性分析和功能研究做铺垫;然后利用牛津杯抑菌圈试验法筛选可抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球杆菌的可培养内生真菌;最后通过HPLC法检测内生真菌与祖师麻药材双向发酵产物,筛选能提高祖师麻甲素含量的可培养内生真菌,为丰富瑞香科植物内生真菌多样性和祖师麻药用价值发挥提供参考。具体研究结果如下:1.利用高通量测序技术对不同产地祖师麻内生真菌测序,共获得632766条有效序列,并将内生真菌分为348个OTU,4门,20纲,48目,108科,154属,208种,其中链格孢属(Altemaria)为优势属,内生真菌多样性分析表明,祖师麻内生真菌群落多样性丰富,且3个采样点祖师麻内生真菌多样性为甘谷县>五台县>宕昌县。2.采用传统单菌落分离法获得711个内生真菌单菌落,利用形态学和分子生物学结合的方法,鉴定了 36株可培养内生真菌的种属,其中链格孢属(Altemaria)为优势属,根据真菌多样性计算方法,不同产地祖师麻内生真菌物种多样性丰富。3.利用牛津杯抑菌圈法发现1株能够制大肠杆菌生长的祖师麻内生真菌,发现2株能够抑制金黄色葡萄球杆菌生长的祖师麻内生真菌。4.利用HPLC法检测初步筛选1株能提高祖师麻药材有效成分含量的菌株,为祖师麻药用价值发挥提供了新方向。本课题分析了祖师麻内生真菌的群落多样性,并确定了祖师麻可培养内生真菌的种类,同时发现了祖师麻内生真菌的新功能,为丰富瑞香科植物内生真菌多样性和祖师麻药用价值发挥提供了参考。