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神经退行性疾病在全世界是引发疾病和死亡率的主要的疾病。该类疾病主要包括阿尔茨海默氏病(Alzheimers disease,AD)、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)、亨廷顿舞蹈症(Huntington disease)、不同类型脊髓小脑共济失调(spinalcerebellar ataxias)、肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic laterals)和肌萎缩症(spinalmuscular atrophy)。这些不同种类的疾病有一个共同的特征,即大脑和脊髓内部神经细胞和神经胶质细胞结构和功能的损伤。尽管神经胶质细胞也会受损,但是许多神经退行性疾病都是由于神经元受到损伤引起的。所以在研究如何治愈神经退行性疾病的同时,保护神经元细胞免受损伤的问题也日益提上日程。
本文第一章绪论部分概述了神经退行性疾病的发病机理及神经退行性疾病的类型,及各种神经退行性疾病的发病原因。接着论述了Sirt1在神经退行性疾病中的研究进展,并进一步阐明了本课题的研究目的及意义。
本文的实验工作主要分为两个部分:
在第一部分实验工作中,本文在Sirt1转基因小鼠的神经元细胞中证明了,人的Sirt1基因能够在小鼠大脑内表达,并且过表达的Sirt1的酶的活性也有了相应的增强。在此基础上我们发现过表达的Sirt1.能够促进神经树突的生长,这说明Sirt1参与了神经元细胞的生长发育过程。而且过表达的Sift1能够在正常生长及缺乏营养因子的状态下提高细胞的生存能力,过表达Sirt1的神经元细胞具有较强的耐受力来抵抗amyloid-β的1-42 oligomers引起的细胞死亡和细胞恶化。
在第二部分实验工作中,我们主要阐明了Sirt1起到神经保护作用的机制,并阐明了Sirt1与mTOR信号通路的调节关系,我们发现过表达的Sirt1在不改变mTOR的mRNA水平的条件下能够下调mTOR和磷酸化mTOR的水平,并且mTOR信号通路的下游p70S6K在Thr389磷酸化的水平也相应的下调。
与Sirt1过表达相一致的结果是,在WT的神经元细胞中,通过siRNA的转染,敲除了部分内源的Sirt1,在内源Sirt1减少的情况下,mTOR的mRNA水平依然没有发生改变,但是总的mTOR和磷酸化mTOR的水平都有所提高,并且mTOR下游的p70S6K的磷酸化水平也有了明显的升高。与此同时,内源性的Sirt1的减少降低了神经元细胞的生存能力和神经突的生长能力。
相应地,为了进一步验证mTOR信号通路本身就与神经的生长有关系,我们在营养因子缺乏的条件下培养神经元细胞发现,mTOR的抑制剂雷帕霉素能够显著的促进细胞的生存能力,并能明显的促进神经突的生长,而且,在内源性的Sirt1减少的情况下,雷帕霉素能够挽救Sirt1的减少引起的神经突生长和细胞生存能力的削弱。
总而言之,本文第一次发现并证明了Sirt1能够促进神经突的生长和细胞的生存能力,而这些在中枢神经系统内对神经元的保护作用有可能是通过下调mTOR信号通路来实现的。