论文部分内容阅读
SWI2/SNF2基因家族成员是一类在真核生物中广泛存在的转录因子。现有研究结果表明,SWI2/SNF2基因家族在植物中可能有以下作用:与植物基因沉默机制有关;调控植物发育进程;与DNA切除修复、同源重组有关等。目前,对水稻中SWI2/SNF2基因家族研究报道较少。
本论文主要对水稻SWI2/SNF2基因家族成员Os04g0629300进行了功能研究,获得主要结果如下:
1.激素和胁迫处理水稻中花11幼苗后的Western blot结果表明2.4-D可诱导Os04g0629300的高表达,而热激处理后Os04g0629300表达明显降低。
2.构建了由Os04g0629300自身启动子驱动的GUS表达载体pOs04g0629300::GUS并转化ZH11,GUS染色结果显示,正常生长条件下pOs04g0629300::GUS表达载体转基因植株的根、茎、叶、穗、花药等处都有一定程度的染色,根中染色最深,而中花11均无染色,表明Os04g0629300在植物的根、茎、叶、穗、花药等处均有表达,在根的表达量最高。pOs04g0629300::GUS表达载体T1转化植株活体染色结果表明2.4-D处理可以提高目标基因在胚芽鞘中的表达,对在根中的表达影响不明显。而42℃热激胁迫,可明显降低目标基因在胚芽鞘及在不定根中的表达。
3.构建了Os04g0629300的过量和反义表达载体转化中花11,经PCR检测T-DNA已经整合到水稻基因组中。Os04g0629300的过量表达载体同时转化哥伦比亚型拟南芥。2.4-D处理Os04g0629300超表达转基因拟南芥结果表明,Os04g0629300可降低外源2.4-D对拟南芥主根生长的抑制作用。
4.pGBKT7-Os04g0629300自激活检测表明Os04g0629300具有自激活活性,分段检测结果表明自激活区域大致为Os04g0629300的前300个氨基酸。将这300氨基酸大致又均分为M-1、M-2、M-3三段后,经检测这三段均具有自激活作用的。
5.对M-1、M-2、M-3做随机突变PCR,验证其自激活活性的变化。结果表明一些氨基酸的突变可以明显降低其自激活的活性。