人乳头瘤病毒(HPV)可引起人类多种良恶性疾患。HPV16、18等高危型由于和宫颈癌等多种恶性肿瘤关系密切，研究较为深入；HPV6、11等低危型是引起尖锐湿疣与呼吸道乳头瘤病的主要病原，随着发病率的增加近年来也日益受到重视。HPV由于生活周期对上皮分化严格依赖，不能在常规的细胞培养体系中传代扩增，长期以来阻碍着人们对其研究的深入；而近年来组织培养与分子生物学技术的进步则为HPV的细胞模型研究注入了新的内容与可能性。本研究选择低危型HPV6、11为研究对象，以人永生化角质形成细胞HaCaT作为宿主细胞，通过转染及感染方式获取携带有HPVDNA的阳性细胞，并对相关感染标志进行检测，旨在在HPV体外研究领域进行初步尝试，为下一步HPV体外药效评价模型的建立及药物抗HPV活性的检测打下基础。全文具体分为两部分。 第一部分 HPV11基因组DNA对HaCaT细胞的转染与检测 目的 探讨应用转染与筛选技术获取稳定携带有HPV11基因组DNA的细胞的可能性；探索合适的HPV感染检测指标与方法。 方法 对含有pBR322.HPV11质粒的大肠杆菌培养扩增，然后进行质粒的提取与纯化，并用限制性内切酶BamHI切割下HPV11全长基因；低熔点琼脂糖回收后，用T4 DNA连接酶进行线状DNA的自身环化，再与PTK-neo质粒按比例混合，以Lipofectamine试剂共转染HaCaT细胞；最后通过G418筛选而得到阳性细胞克隆。将阳性克隆细胞合并与培养扩增后，用FQ-PCR及PRINS技术检测所得细胞内HPV11DNA的存在，用巢式RT—PCR技术检测HPV11 E1^4mRNA的表达，用免疫组化技术检测HPV衣壳抗原的表达。 结果 G418筛选约两周后，培养皿内即可见到对G418抵抗的阳性细胞克隆出现，其形态与普通HaCaT细胞无区别。FQ—PCR与PRINS方法均可在筛选后的HaCaT细胞中检测到HPV11DNA的存在。RT—PCR扩增产物行琼脂糖凝胶电泳可检测到特异性的628bp阳性条带。免疫组化染色未检测到HPV衣壳抗原表达。 结论 HPV11基因组DNA可通过脂质体转染法成功导入HaCaT细胞内，通