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目的：观察不同浓度甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine,5-aza-2dC)对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞系HL-60细胞的凋亡诱导作用及对死亡蛋白相关激酶(death associated protein kinase,DAPK)基因表达的影响,探讨5-aza-2dC治疗AML的作用机制,为AML发病机制研究及临床应用甲基转移酶抑制剂治疗白血病提供实验依据。方法：1采用HL-60细胞株作为白血病模型。2分组及干预：实验共设七组,实验组加入终浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2umol/L的5-aza-2dC,以不加药物组为对照组。每组设三个重复孔,采用肿瘤细胞体外培养技术培养72h。3采用MTT比色法观察5-aza-2dC对HL-60细胞增殖活性的影响。4采用瑞式染色法鉴定细胞及观察5-aza-2dC对HL-60细胞凋亡形态学的影响。5采用流式细胞术检测不同浓度5-aza-2dC对HL-60细胞凋亡发生的影响。6采用实时荧光定量PCR法观察不同浓度5-aza-2dC处理后HL-60细胞DAPK mRNA的表达情况：6.1培养72h后分别提取各组细胞总RNA,用1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA分子的完整性。6.2通过随机引物将各组总RNA逆转录为cDNA,采用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(Fluorescence Quantitative Real Time Polymerize Chain Reaction, FQ-RT-PCR)技术检测凋亡过程中各组细胞DAPK基因的表达。6.3随机抽取逆转录的DAPK基因进行电泳分别获得电泳图。将DAPK基因cDNA和ACTB基因阳性产物cDNA梯度稀释制作各自的标准曲线,根据各个样本循环指数增长期的起始点即循环域值(cyclethreshold,Ct)和标准曲线斜率计算各自样本起始cDNA模板量倍数值,以ACTB基因作为内参进行标化。6.4DAPK基因相对表达量：用DNA相对拷贝数和RNA表达相对量(2-ΔΔCt)表示DAPK基因相对表达量。7统计方法：所有数据资料均用均数加减标准差(X土S)表示。进行方差齐性检验,ONE-WAY AONVA方差分析,组间均数两两比较用LSD法。用SPSS13.0软件进行统计分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果：1MTT检测结果显示,5-aza-2dC呈浓度依赖性地抑制HL-60的增殖。2瑞氏染色证明所培养细胞是粒细胞,随着药物浓度增加凋亡细胞愈为明显,在倒置光学显微镜下观察可见细胞体积变小、胞浆量减少、核固缩、核碎裂、染色质向核膜靠近等典型的细胞凋亡形态学变化,部分细胞胞膜有伪足样突起、细胞内出现凋亡小体。3流式细胞术检测结果表明,5-aza-2dC对HL-60细胞的凋亡诱导作用呈浓度依赖性增强,与对照组相比,均有统计学意义(P<0.05)。4 RT-PCR结果显示,对照组HL-60细胞有表达DAPK基因；随着5-aza-2dC浓度增加,HL-60细胞中DAPK基因mRNA表达趋势逐渐增高,与对照组相比,5-aza-2dC达到一定作用浓度后被处理的细胞开始出现DAPK基因差异表达。结论：15-aza-2dC呈浓度依赖性地诱导HL-60细胞凋亡。2HL-60细胞有表达DAPK基因,5-aza-2dC处理后HL-60细胞DAPK基因表达水平有增高趋势,且具有一定的浓度依赖性。3随着5-aza-2dC浓度的增加,HL-60细胞凋亡的发生及DAPK基因的表达水平均有上升趋势。提示,DAPK基因可能是5-aza-2dC诱导HL-60细胞凋亡的调控基因之一。