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目的:
观察PinpointeTMFootlaserTM长脉宽治疗仪(Nd:YAG1064nm激光)治疗甲真菌病的有效性及安全性,探讨Nd:YAG1064nm激光治疗甲真菌病的作用机制。
方法:
1.将33例患者(154个病甲)随机分为甲乙两组,其中甲组15例(78个病甲),治疗两个疗程(8次),乙组18例(76个病甲)治疗一个疗程(4次)。每组病甲根据甲真菌病临床评分指数评分系统各分为A(Ⅱ度)、B(Ⅲ度)、C(Ⅳ度)三个亚组。
2.选取一临床有效株NO.018(红色毛癣菌),接种于20个平皿并随机分为4组,即200J/cm2处理组、400J/cm2处理组、600J/cm2处理组及空白对照组。于接种第9天时给予激光照射,连续照射3天。自激光照射第一天起,对每组培养基拍照、计算菌落面积。重复上述试验,于激光后24小时内将200J/cm2处理组、400J/cm2处理组、600J/cm2处理组及空白对照组菌落取材送电镜标本。
3.选取上述菌株,接种于12个平皿并随机分为上述4组,于接种第6天时给予激光照射,然后液氮研磨破壁,配制成菌悬液。用比色法及酶标法测定过氧化氢含量、抑制羟自由基能力、抗超氧阴离子自由基活力及超氧化物歧化酶活力。
结果:
1.甲组第8周、16周、24周有效率分别为62.8%、61.3%、51.3%,乙组第8周、16周、24周有效率分别为68.4%、67.1%、52.6%,甲乙两组第24周时临床疗效及A、B、C三个亚组临床疗效差异无统计学意义(P>0.05)。
2.不同能量处理后比较菌落大小发现:600J/cm2处理组完全抑制了红色毛癣菌的生长;400J/cm2处理组明显抑制了其生长;200J/cm2处理组抑制不明显。激光处理组作用于红色毛癣菌后扫描电镜均表现为:菌丝表面变粗糙,菌丝萎缩、皱瘪、粗细不一,出现多处破损、断裂和小的破坏性孔洞;透射电镜均表现为:细胞壁厚薄不均;细胞浆结构模糊,细胞核凝固、破碎,600J/cm2处理组较前两组胞浆结构更模糊,细胞器损伤更严重。空白对照组:基本无破坏。
3.活性氧测定结果:空白对照组、200J/cm2处理组、400J/cm2处理组及600J/cm2处理组过氧化氢含量分别为:32.79mmol/gprot、65.45mmol/gprot、116.43mmol/gprot、201.49mmol/gprot;抑制羟自由基能力分别为:1023.75U/mgprot、258.60U/mgprot、233.27U/mgprot、71.62U/mgprot;抗超氧阴离子自由基活力分别为:2801.90U/gprot、854.85U/gprot、847.46U/gprot、537.97U/gprot;超氧化物歧化酶活力分别为:410.65U/mgprot、148.59U/mgprot、141.41U/mgprot、91.53U/mgprot。
结论:
1.激光治疗甲真菌病疗效肯定,且无不良反应,有望成为药物的替代疗法,尤其适合于年老、免疫力低下和肝肾功能不全的患者,值得临床推广。
2.长脉宽Nd:YAG1064nm激光可以明显抑制红色毛癣菌的生长。三组激光处理组均可使红色毛癣菌超微结构发生显著改变。
3.活性氧在激光治疗甲真菌病中发挥了重要作用。