论文部分内容阅读
一.兔骨髓间充质干细胞体外培养生物学特征的实验观察目的探索骨髓间充质干细胞体外分离培养的最佳实验条件,并进行生物学特征的观察。方法自股骨大转子及髓腔抽取新西兰大耳白兔骨髓,采用密度梯度离心法获取离心层单个核细胞,体外接种连续培养观察,原代接种后48 小时首次换液,此后每2～3 天全量换液;待细胞长至90%汇合时,用0.25%的胰酶和0.02%的EDTA 混合液消化传代。采用倒置显微镜下进行细胞生长形态观察,四唑盐MTT 法测定细胞活性并描绘细胞生长曲线;另选择P3代细胞进行成骨条件培养液培养4 周,进行细胞碱性磷酸酶(Gomori 钙钴法)染色和矿化结节(Von-Kossa 改良法)染色观察。结果采用该方法分离培养的骨髓间充质干细胞生长形态和增殖活性良好,接种后的细胞有短梭形向长梭形、三角形乃至多角性发展,各代细胞有明显的生长潜伏期、对数增长期和平台期,细胞可以连续培养至P9代。经成骨诱导分化的细胞胞碱性磷酸酶染色阳性率为93%(对照组5%),矿化结节染色阳性。结论骨髓间充质干细胞体外分离、扩增简单可行,可以定向诱导成成骨细胞,是很有希望的骨组织工程种子细胞。 二.骨髓间充质干细胞在丝素蛋白/牛骨形态发生蛋白载体系统中的生物学行为目的实验室组合丝素蛋白与牛骨形态发生蛋白的载体系统,观察体外与骨髓间充质干细胞的相容性,初步评估载体系统的现实意义,同时进行骨组织工程三要素体外组合相互影响的初步观察,探索组织工程骨的有效构建方式方法实验室组合丝素蛋白与牛骨形态发生蛋白的载体系统:将多孔丝素蛋白修剪成20×10×5mm长方体状物,置入6孔板中;将粉状bBMP用PBS液溶解制成2mg/ml混悬液,0.5ml 无菌移液管滴定于多孔丝素蛋白上(0.5ml/个)。按第一部分内容进行