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研究目的:动脉硬化发生、发展是复杂并受多种因素影响的慢性过程。病人病情稳定与否不仅与动脉硬化管腔狭窄程度有关,与斑块炎症是否活跃更密切相关。炎性细胞和细胞因子参与动脉硬化斑块变化的病理过程。基质金属蛋白酶9(Matrix MetalloProteinase-9 MMP-9)在动脉粥样硬化形成过程中起到了重要作用,MMP-9降解胶原,减弱动脉粥样硬化斑块中纤维帽强度,导致了斑块不稳定性增加,从而促进急性冠脉综合症等的发病。本项研究观察基质金属蛋白酶9在人动脉硬化组织中的表达,探讨胰岛素样生长因子(IGF-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及他汀药物对其表达的影响。研究方法:动脉硬化组织取自择期开放外科手术标本,术后病理检查证实为动脉硬化组织。对照组动脉标本取自非正常死亡成人标本,经大体和镜下病理检查证实为正常主动组织。所有标本4 %多聚甲醛固定12h,常规脱水,石蜡包埋切片。HE染色及标准免疫组织化学染色检测。人血管平滑肌细胞取自外科开放手术标本,细胞的分离、培养、收集、冻存、复苏,以RT-PCR和Western blot技术测定不同浓度TNF-α诱导下血管平滑肌细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达;不同浓度匹伐他汀对TNF-α的干预作用。免疫组织化学结果判断:由两位以上病理医师采用双盲法观察每张切片。判定阳性反应依据:按光镜下(×400)随机选10个不重复视野,按阳性细胞百分率评分: < 25%定为阴性(0分), 26%～50%定为弱阳性(1分), 51%-75%定为中度阳性(2分),>76%-100%为强阳性(3分)。RT-PCR判断方法:紫外线灯下观察照相,同时出现内参及目的基因条带为阳性。仅出现内参者为阴性。扫描仪进行灰度扫描,Image Tool Version2.0软件分析结果。Western blot检测判断方法:扫描仪进行灰度扫描,Image Tool Version2.0软件分析结果,以各检测蛋白和β-actin扫描灰度的比值作为评价各蛋白表达水平的指标。结果:正常腹主动脉壁内未见明显MMP–9、MCP-1、IL-1β分布,TNF-α、IGF-1染色呈阳性或弱阳性;动脉硬化组织中MMP–9主要分布在动脉壁中膜、外膜炎细胞浸润区,呈片状或连续分布,MCP-1出现在排列紊乱的炎性细胞聚集处,阳性细胞多为成纤维细胞、巨噬细胞;IGF-1在动脉硬化组织中染色呈弱阳性或阴性,浅棕黄色阳性染色偶见于散在分布的血管平滑肌细胞内。IL-1β、TNF-α在正常主动脉无强阳性表达,偶有浅棕黄色染色分布于血管平滑肌细胞中,在动脉粥样硬化组织中分布主要位于血管内皮细胞及增生的血管平滑肌细胞内。TNF-α分布主要位于血管中膜、外膜,及血管壁中的巨噬细胞等炎性细胞浸润区域。MMP-9分布与MCP-1、TNF-α、IL-1β分布呈正相关,与IGF-1蛋白表达呈负相关;分布有显著或极显著差异。TNF-α呈浓度依赖方式(1/10/100ng/ml)增加血管平滑肌细胞MMP-9 mRNA和蛋白的表达,统计学差异显著(P<0.01)。不同浓度匹伐他汀(0.1、1、10、100、500nm)可拮抗TNF-α(100ng/ml)促血管平滑肌细胞MMP-9 mRNA和蛋白的表达,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:人动脉硬化组织中均有MMP-9、TNF-α、MCP-1、IGF-1、IL-1β的表达,但分布不同;TNF-α增加血管平滑肌细胞MMP-9的表达,匹伐他汀可拮抗TNF-α对血管平滑肌细胞MMP-9表达。结果提示不同细胞因子间的相互作用和平衡失调可能是动脉硬化斑块不稳定的病理基础,他汀类药物通过调节细胞因子间的相互影响是发挥其抗动脉硬化作用机制之一。