拟南芥幼苗盐胁迫响应蛋白组学研究

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土壤盐渍化一直是困扰农业生产的一大难题,对于土地资源日趋紧张的今天,如何合理利用盐渍化土壤成了当今各国的一个重要课题。拟南芥(Arabidopsisthaliana)作为一种模式植物,研究拟南芥在盐胁迫下的应答响应机制,对揭示植物的抗盐机理,培育新的抗盐品种、合理利用盐渍土壤有着极其重要的作用。  本研究以野生型拟南芥幼苗为材料,利用双向凝胶差异电泳(2D-DIGE)技术分别分析了拟南芥幼叶和幼根在100 mM NaCl胁迫下的蛋白差异表达情况,通过MALDI-TOF/TOF MS质谱分析,在幼叶和幼根中分别鉴定出127和109个受盐胁迫影响而变化显著的蛋白点,分别包括83和82种蛋白质。并对成功鉴定的蛋白进行了COG功能分类、GO注释分析、亚细胞定位及参与KEGG通路的分析。在幼叶中鉴定的蛋白,有52个酶类参与了22个代谢通路,其中光合碳固定途径有9个酶类参与,乙醛酸盐和二羧酸代谢有5个酶类参与。在根中鉴定的蛋白,有53个酶类参与了30个代谢通路,其中糖酵解有6个蛋白酶类参与,谷胱甘肽代谢有5个蛋白酶类参与。为了进一步评估表达蛋白与对应转录水平的关联性,我们对其中62个差异表达蛋白基因进行了半定量RT-PCR分析,结果大体与蛋白表达水平相符。为更进一步分析重要盐响应基因的功能,我们构建了其中12个基因的过表达载体,并得到了其中10个基因的相关过表达拟南芥株系,且对其中的CA2(T3代)过表达株系进行了初步的耐盐表型验证,发现CA2基因的过表达可以明显的增加拟南芥植株的耐盐性。通过差异蛋白组学技术初步分析了拟南芥幼苗响应NaCl胁迫的应答机制,同时过表达实验的初步结果为进一步确认这些基因的功能提供了良好的基础,这些都为深入研究植物的盐胁迫响应机制提供了新的依据。
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