【摘 要】
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骨关节炎（OA）是一种以关节软骨退行性病变为主要特征的关节疾病,严重危害家畜健康,影响畜牧业健康发展。目前,临床上OA药物治疗手段比较单一,以减轻疼痛和缓解症状为主。近年来,植物提取物因其使用安全、生物活性多样而备受关注。松萝酸作为中药松萝的有效成分之一,具有抗炎、抗氧化和抗骨质疏松症等多种药理作用,但其在OA中作用尚未有相关报道。因此,本研究通过体外培养大鼠软骨细胞,探索松萝酸对OA的保护作用及
【基金项目】
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国家重点研发计划（2017YFD0502200）； 十三五重大专项省级资助项目（GX18B023）；
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骨关节炎（OA）是一种以关节软骨退行性病变为主要特征的关节疾病,严重危害家畜健康,影响畜牧业健康发展。目前,临床上OA药物治疗手段比较单一,以减轻疼痛和缓解症状为主。近年来,植物提取物因其使用安全、生物活性多样而备受关注。松萝酸作为中药松萝的有效成分之一,具有抗炎、抗氧化和抗骨质疏松症等多种药理作用,但其在OA中作用尚未有相关报道。因此,本研究通过体外培养大鼠软骨细胞,探索松萝酸对OA的保护作用及分子机制,为今后松萝酸的临床应用和OA药物开发提供理论基础。本研究在体外培养大鼠原代软骨细胞,细胞经过同步化处理后进行试验,分为对照组、模型组（10 ng/m L IL-1β）、低剂量松萝酸组（10 ng/m L IL-1β+2.5μM松萝酸）、中剂量松萝酸组（10 ng/m L IL-1β+5μM松萝酸）和高剂量松萝酸组（10 ng/m L IL-1β+10μM松萝酸）。处理24 h后,提取各组软骨细胞培养上清液、总RNA和蛋白,使用ELISA、q PCR和Western blot等方法检测IL-6、TNF-α、COX-2、PGE2水平,确定松萝酸能否抑制IL-1β诱导的炎症介质表达。此外,使用q PCR和Western blot检测ADAMTS-4、MMP-1、MMP-3、MMP-13表达水平,并通过q PCR和免疫荧光测定Col II变化,确定松萝酸能否抑制IL-1β诱导的软骨细胞外基质降解。之后,通过Western blot检测软骨细胞中p-p65和p-IκBα水平,并使用免疫荧光检测p-p65核转位,探究松萝酸是否通过抑制NF-κB信号通路的活化发挥抗炎和抗基质降解作用。最后,使用Western blot检测细胞核内Nrf2蛋白水平变化,并测定其下游关键蛋白HO-1和NQO1表达水平,探究松萝酸对Nrf2信号通路的作用。研究结果显示:（1）松萝酸能够使IL-1β诱导上调的IL-6、TNF-α、COX-2基因转录水平降低,减少COX-2蛋白表达,并下调细胞培养上清液中IL-6、TNF-α和PGE2水平。（2）松萝酸能够在m RNA和蛋白水平上,抑制ADAMTS-4、MMP-1、MMP-3和MMP-13等基质降解酶表达,并使Col II表达增加。（3）IL-1β诱导可以引起IκBα磷酸化、p65磷酸化以及p-p65核转位,松萝酸能够抑制这种作用。（4）松萝酸能够上调细胞核内Nrf2蛋白水平,并促进HO-1和NQO1等抗氧化酶表达。研究结果表明:（1）松萝酸可以下调10 ng/ml IL-1β诱导的大鼠软骨细胞中炎症介质和基质降解酶水平,通过抗炎和抗基质降解途径保护软骨细胞,其中10μM松萝酸干预效果最好。（2）松萝酸可以上调Nrf2/HO-1/NQO1蛋白表达水平,抑制p65磷酸化以及核转位过程,通过靶向Nrf2/NF-κB信号通路发挥软骨保护作用。
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