【摘 要】
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该研究通过RT-PCR扩增到了抑瘤素-M的cDNA,并在此基础上,用PCR的方法截去C一端的31个氨基酸,并将此cDNA克隆进pBV、pTF和pGEX-2T、pGEX-KG等几个载体中进行了表达.在上述几种
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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该研究通过RT-PCR扩增到了抑瘤素-M的cDNA,并在此基础上,用PCR的方法截去C一端的31个氨基酸,并将此cDNA克隆进pBV、pTF和pGEX-2T、pGEX-KG等几个载体中进行了表达.在上述几种表达系统中,GST系统的表达最好,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%以上,通过表达条件的优化,在5L罐中,融合蛋白形成的包涵体可达全菌蛋白的50%以上,在低温诱导条件下,可溶性蛋白中融合蛋白的量也可达15%,达到了国际先进水平,进而将GST表达系统表达的包涵体形式和可溶的融合蛋白分别进行了变复性和纯化,通过一步亲和层析,融合蛋白的纯度达到90%.利用国际通用的黑色素瘤A375细胞检测了抑瘤素-M的抑制活性,将不同系统中的表达产物进行了活性测定.首次研究了N-端氨基酸的改动对OSM活性的影响.此外,还在研究中进行了酵母表达的初步尝试.这样,简捷方便的OSM高效表达系统的建立,为对OSM的进一步研究打下了良好的基础.
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