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研究背景 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种以自身抗体产生和组织中免疫复合物沉积为特征的慢性自身免疫性疾病。其临床表现可从轻微的皮肤病变到严重的器官损伤，约60％的患者发生肾小球肾炎，而肾小球肾炎最终可能导致终末期肾病。SLE好发于中青年女性，患者的生活质量较差，因而对育龄期女性的身心健康造成严重影响。目前SLE的病因和发病机制尚未完全阐明，可能是受遗传因素、环境因素和免疫因素等多方面的影响。 白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）是一种具有抗炎特性的细胞因子，通过限制对病原体的免疫反应，从而阻止其对宿主的损伤，在感染中起着核心作用。如SLE这样的炎症性疾病的特征是体内异常的细胞因子表达，促炎和抗炎细胞因子之间的平衡被打破，易引起炎症反应。IL-10在维持这种平衡方面起着关键的作用，因为它能阻断炎性细胞因子和趋化因子的分泌，影响炎性酶的产生和共刺激分子（包括CD80、CD86和II类主要组织相容性复合物）的表达。此外，IL-10还可促进IL-1受体拮抗剂（IL-1 receptor antagonists,IL-1RA）和可溶性肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）受体的产生用以抵抗炎症。然而，在某些情况下，IL-10又发挥免疫刺激作用，可引起B细胞增殖、分化，是类别转换和抗体产生的有效辅助因子。 IL-10在人类的免疫系统调节中发挥着重要作用，越来越多的研究关注IL-10在不同免疫细胞中的表达调控作用，大量研究表明IL-10在自身免疫性疾病中发挥了重要的作用。然而目前在中国汉族人群中开展的IL-10基因多态性与SLE遗传易感性的关联研究非常有限，且都局限在IL-10基因启动子区域。 目的 检测SLE病例组和健康对照组外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）中IL-10 mRNA表达水平以及血浆中IL-10表达水平，并探讨IL-10基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与中国汉族人群SLE遗传易感性之间的关联，以及其SNP与SLE患者的PBMCs中IL-10 mRNA表达水平和血浆中IL-10蛋白表达水平的关联。 方法 本研究采用病例对照设计。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测PBMCs中IL-10 mRNA表达水平，纳入74例SLE病例和57例健康对照；采用酶联免疫吸附试验（enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA）检测血浆中IL-10表达水平，纳入74例SLE病例和74例健康对照；通过Fluidigm EP1平台以及Taq Man SNP探针分型方法对9个SNP位点进行基因分型实验，纳入848例SLE病例和461例健康对照。收集研究对象的临床资料，并依据系统性红斑狼疮疾病活动性指数（systemic lupus erythematosus disease activity index 2000，SLEDAI-2K）量表对SLE病人的疾病活动度进行评分，分析这些指标与IL-10表达水平及IL-10 SNP之间的关联。对9个SNP位点的统计分析进行Bonferroni多重校正，检验水准α=0.0056（0.05/9），其余统计分析检验水准α=0.05。 结果 （1）SLE患者和健康对照IL-10 mRNA和血浆IL-10表达水平的比较：IL-10在SLE病例PBMCs和血浆中的表达水平均高于健康对照，差异均有统计学意义（Z1=-2.066，P1=0.039；Z2=-2.174，P2=0.030）；与对照组相比，活动组SLE患者和狼疮肾炎（lupus nephritis,LN）患者PBMCs中IL-10 mRNA表达水平更高（Z1=-2.989，P1=0.003；Z2=-2.709，P2=0.007）；与对照组相比，活动组SLE患者血浆中IL-10表达水平更高（Z=-2.153，P=0.031）。 （2）SLE患者IL-10 mRNA和血浆IL-10表达水平在不同临床表现、实验室指标和用药情况的比较：IL-10 mRNA在SLE合并蛋白尿阳性病例PBMCs中的表达水平高于蛋白尿阴性病例中的表达水平，差异有统计学意义（Z=-2.134，P=0.033）；IL-10 mRNA在服用羟氯喹（hydroxychloroquine，HCQ）的SLE病例PBMCs中的表达水平低于不服用HCQ的SLE病例中的表达水平，差异有统计学意义（Z=-2.504，P=0.012），HCQ的服用量与IL-10 mRNA的表达水平呈负相关（rs=-0.235，P=0.047）。血浆中IL-10在SLE合并视觉障碍病例中的表达水平高于无视觉障碍病例中的表达水平，差异有统计学意义（Z=-2.172，P=0.030）。 （3）SLE患者IL-10 mRNA和血浆IL-10表达水平与疾病活动情况的关联性分析：SLE病例PBMCs中IL-10 mRNA的表达水平和血浆中IL-10的表达水平均未发现与SLEDAI-2K评分存在相关性（均有P＞0.05）；且，PBMCs中IL-10 mRNA的表达水平和血浆中IL-10的表达水平也未发现存在相关性（rs=-0.193，P=0.100）。 （4）IL-10基因的9个SNP位点与SLE的易感性分析：rs3024498的C和T等位基因频率在SLE病例与健康对照之间的差异有统计学意义（?2=9.566，P=0.002，OR=5.118，95%CI：1.819-14.405）；而其余8个SNP位点的基因型频率和等位基因频率在SLE病例与健康对照之间的差异均无统计学意义（均有P＞0.0056）。遗传模型分析发现，显性模型和隐性模型在SLE病例组与对照组之间的分布差异也均无统计学意义（均有P＞0.0056）。 （5）IL-10基因SNP位点与不同临床表现和实验室指标的关联分析：rs1518110位点和rs1518111位点的基因型频率在是否伴有头痛的SLE患者中的分布差异均有统计学意义（均有P＜0.05）。rs1800890位点的基因型频率和等位基因频率与SLE患者是否伴有血小板减少之间的分布差异均有统计学意义（均有P＜0.05）。rs1800893位点的基因型频率和等位基因频率与SLE患者是否伴有管型尿、蛋白尿之间的分布差异均有统计学意义（均有P＜0.05）；rs1800893位点的等位基因频率与SLE患者是否伴有血小板减少之间的分布差异有统计学意义（?2=5.957，P=0.015）。rs3024498位点的基因型频率和等位基因频率在是否伴有关节炎的SLE患者中的分布差异均有统计学意义（均有P＜0.05）；rs3024498位点的基因型频率与SLE患者是否伴有蝶形红斑之间的分布差异有统计学意义（确切概率法，P=0.040）；rs3024498位点的等位基因频率与SLE患者是否伴有抗ds-DNA增加之间的分布差异有统计学意义（?2=4.624，P=0.032）。rs6667202位点的基因型频率和等位基因频率与SLE患者是否伴有血小板减少之间的分布差异均有统计学意义（均有P＜0.05）。 （6）IL-10基因多态性的单倍型分析及其与IL-10 mRNA和血浆IL-10表达水平的相关性：高度连锁的3个SNP位点（rs1518110、rs1518111、rs1554286）构建的单倍型与SLE的发病风险无关（均有P＞0.05）。IL-10在SLE患者PBMCs和血浆中的表达水平与9个SNP位点之间均无统计学关联（均有P＞0.05）。 结论 IL-10在SLE病人PBMCs和血浆中的表达水平均高于健康对照。进一步分析发现，IL-10 mRNA在PBMCs中的表达水平可能影响肾脏功能，高水平表达的SLE患者易产生阳性蛋白尿，与此同时，HCQ服用量也影响IL-10 mRNA的表达水平，呈负相关。此外，血浆IL-10高水平表达易使SLE患者出现视觉障碍。基因多态性实验研究结果发现，rs3024498与SLE易感性存在关联；并且，部分SNP位点与SLE病例的某些临床表型和实验室指标有关。以上结果提示IL-10基因与SLE易感性之间存在关联。