基因多态性与人类疾病发生与发展的内在联系是当前国际上临床医学十分重视的前沿性课题。近几年来,在肾脏病领域这方面的工作较活跃,取得了初步成就。同一种肾脏疾病,临床表现及预后常存在着明显差异,在中国人和西方人之间其表现可以悬殊很大。以往常笼统地归咎于个体遗传体质的不同,而疾病基因多态性的研究为我们提供了新的认识。终末期肾功能衰竭(ESRD)是严重危害人们健康的疾病之一,发病率为1/1000,尽管经透析疗法,每年平均是死亡率达20%。IgA肾病(IgA nephropathy),为各类原发性肾小球疾病最常见的类型,是导致ESRD的主要疾病,世界范围的发病率为1.3%。在新加坡,Woo KT报导该病占各类原发性肾小球疾病肾脏活检病人的52%。以往该疾病被认为预后良好,呈被称为良性家族性血尿,但经长期随访发现,有9%到50%的IgA肾病病人于发病20年内进展到终末期肾功能衰竭。IgA肾病是不同病因引起的具有相同免疫病理学特征的肾小球疾病。发病原因有多种,包括环境因素,遗传因素,IgA1分子本身结构异常以及各种炎症因子的作用。据报导,严重蛋白尿,尿蛋白大于1g/d、高血压、高血脂、肾功能持续下降;肾病理表现为肾小球硬化、新月体形成伴球囊粘连,中度或重度肾小管一间质病变者,均预后不良,但这些症状的出现提示肾功能已经受到较严重损伤,能否对疾病进行早期预测,避免发展到ESRD是当前研究的热点。 IgA肾病发生具有地域性和家族聚集的特点。它的发生在不同洲、不同国家或在一个国家不同地区的差异很大,黑色人种的发病率明显低,而且IgA肾病患山东大学博士学位论文者家族成员的免疫学研究已发现与患者有类似的异常免疫学反应。说明遗传易感因素在IgA肾病发病中的重要性。有报导显示IgA肾病的发生率与主要主组织相容性I类抗原(HLA一BW35)及11类抗原(HLA一DRBI)出现的频率明显相关,且有明显的家族聚集的特点。新近有学者报道IgA肾病的发生与染色体6q22一23之间存在连锁关系。可见遗传因素在IgA肾病的发生中起至关重要的作用。如能找到与IgA肾病的发生关的基因。将有助于对IgA肾病进行风险预测和新的药物筛选及治疗措施的制定。 人类基因组共包括约30亿个碱基,人类基因组计划已基本测出了这30亿个碱基的排列顺序。不同人之间基因组的碱基排列顺序绝大多数一致,但也存在着极小差异,这种遗传性变异被称作“单核昔酸多态性”,即SNP。人类基因组中约有1000万个SNPs,不同人之所以对疾病的易感程度有所区别、对药物会产生不同反应,据认为部分受到SNP影响决定。识别出人类基因组的所有“单核昔酸多态性”,在医疗上的重要性不言而喻。理论上,可以通过对整个人类基因组的分析来实现,但工作量太大。科学家们发现,在DNA上位置比较接近的很多SNPs,会组成所谓“单倍型块(h apfotyPe)”,并可作为一个整体而遗传;而且,通过极少数的几个标记SNPs,就可以识别出不同的“单倍型块”。绘出人类基因组的“单倍型块”,以及不同“单倍型块”的标记SNPs,有望为寻找人体致病基因提供一条捷径。 肾素一血管紧张素系统(RAS)在血压和体液的平衡的调节起非常重要的作用。其中血管紧张素转换酶(ACE)的作用尤为重要,它催化无活性的血管紧张素I(ATI)转化为具有强缩血管活性的血管紧张素11(ATll),以及催化舒血管的缓激肤水解,使其失去舒血管活性,最终使收缩血管,升高血压。关于血管紧张素转换酶基因即ACE多态性的研究很多,其中绝大多数研究都是对分布在第16个内含子287碱基的Alu重复序列插入和缺失的研究。据报导该基因多态性与血浆ACE酶的活性变化明显有关,D等位基因携带者具有潜在心肌梗死和左心室肥厚的危险性。对于慢性进展性IgA肾病和糖尿病肾病患者,D等位基因携带者容易较快进展到ESED,还有研究表明DD基因型患者对血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)有较好的治疗反应。但是研究结果不相一致。山东大学博士学位论文 本研究中,我们抽取12例样本进行ACE基因组序列测定,对所有SNPs进行识别,然后选取少数有意义的SNPs进行大样本(100病人,100正常对照)鉴别,对其进行连锁不平衡(LD)分析,识别出不同的“单倍型块”。试图找到疾病相关的基因单倍型块。目前为止,我们没有发现对亚洲裔ACE基因全基因序列多态性的相关研究,仅见形eder研究小组对5例非洲裔的美国人和6例欧州裔的美国人进行ACE基因序列研究,且均为正常人。本研究为首次对华人进行ACE全核营酸序列测定,其中包括8例IgA肾病患者。 目的:选8例IgA肾病患者以及4例正常对照进行ACE全序列分析,然后选取大样本(100病人,100正常对照)对少数有意义的SNPs鉴别,对其进行连锁不平衡(LD)分析,识别出不同的“单倍型块”。试图找到疾病相关的基因单倍型块。以期找到与IgA肾病相关的核昔酸多态性,并比较种族之间的差异。 方法:入选病例来自新加坡中央医院肾脏内科于1978年至2000年住院并进行肾活检确诊的IgA肾病患者,均符合原发性IgA肾病诊断标准。正常对照组均排除肾脏疾病及其他慢性疾病。 首先,采用PCR法将包括点突变的基因片段扩增,再经核昔酸序列分析即可发现sNP位点。nNA抽提按照QIAamp nNA blood extraetion kit说明,从o