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螺蛳属Margarya隶属于软体动物门Mollusca,腹足纲Gastropoda,前鳃亚纲Prosobranehia,中腹足目Mesogastropoda,田螺科Viviparidae,环棱螺亚科Bellamyinae。仅分布于中国西南高原云南省的昆明滇池、大理洱海、澄江抚仙湖、星云湖、蒙自大屯海、石屏异龙湖和宜良阳宗海等湖泊,是云南省的特有属。Nevill于1877年将其定为新属,到目前为止,共记载9种2亚种。螺蛳属动物不仅分化强烈,还有几个种生活在同一水体中,即同域分布的情况。这种现象尤以滇池为典型,并且被视为由同域物种形成方式形成。因此,无论在物种分类和系统发育,还是在物种起源、形成方式、物种演化和历史生物地理学等方面,我省特有螺蛳属动物,都是极有价值的研究材料。然而对螺蛳属动物的研究,以往主要是在形态分类上做了较多工作,细胞遗传与生态分布研究也有一些开展。但是其它方面,都缺乏研究。甚至在分类上也还存在一些争议问题。认为滇池的螺蛳属动物是同域物种分化而成,也无确凿证据。由于随机扩增多态性DNA(RAPD)因其有别于其它标记法独到的优点,已被广泛地应用于分子生物学的研究中。线粒体DNA(mtDNA)COI基因由于进化快,适合于种群以及种间差异的检测分析,在遗传进化研究等方面得到广泛的应用并取得良好效果。因此,本研究对螺蛳A(M. melanioides)、螺蛳(M. melanioides dianchiensisi sp.nov)、乳顶螺蛳(M.topidophora)、牟氏螺蛳(M.monodlDautzenberg et Fischer)、阳宗海螺蛳(M. rangtsunghaiensis)和外群:中国圆田螺(Cipangopaludina chinensis)采用RAPD技术和PCR-测序技术分别对其核基因组遗传标记和mtDNA COI基因序列的多态性进行了分析研究,取得主要研究结果如下:
1.螺蛳属动物随机扩增多态DNA(RAPD)分析所筛选5个引物扩增共获得40条谱带,单个引物扩增的RAPD标记在6~10个之间,平均8个标记,片段长度在180bp~1600bp之间。系统树显示:螺蛳A与螺蛳B聚为一支、乳顶螺蛳和牟氏螺蛳聚为一支,这4种动物亲缘关系较近,且共同组成一个大支,阳宗海螺蛳与上述4种动物的亲缘关系较远,成为单独进化的类群。
2.螺蛳属动物COI基因大小为636bp,系统树显示,首先分成两个大支系,其中一支是阳宗海螺蛳,另一支由螺蛳A、螺蛳B、乳顶螺蛳和牟氏螺蛳组成,这一支中,首先分出的是牟氏螺蛳,其次是乳顶螺蛳,余下的分支由螺蛳A和螺蛳B组成。
3.依据分子系统树的聚类结果和各物种间的遗传距离差异等结果,发现:无论是用RAPD技术还是线粒体DNA COI基因序列分析,都揭示出螺蛳A,螺蛳B,乳顶螺蛳和牟氏螺蛳的遗传距离远小于异域分布的阳宗海螺蛳的遗传距离。从分子角度证明了螺蛳A,螺蛳B,乳顶螺蛳和牟氏螺蛳由同域物种分化而成,阳宗海螺蛳由异域物种分化而成。
4.从RAPD分析和线粒体DNA COI基因序列分析结果都显示螺蛳A和螺蛳B的相似性系数很大,达0.8750/0.971,它们之间的遗传距离很小为1.5374%/0.0110%。我们认为螺蛳B为螺蛳属的新亚种,定名为螺蛳滇池亚种M.melanoides dianchiensis Wang et Huang,2007。