【摘 要】
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葡萄(Vitis spp.)是世界重要的果树之一,在生产上广泛栽培的欧亚种葡萄(Vitis vinifera L.)特别容易感染白粉病。这种由葡萄白粉菌(Erysiphe necator Schw.)引起的真菌病害正在使葡萄产业受到严峻挑战。许多研究表明,病原菌能够通过分泌效应因子干扰植物免疫系统,从而促进对寄主细胞的侵染。尽管病原菌与植物相互作用的研究较多,但关于葡萄与葡萄白粉菌效应因子互作的研
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:31972986,31772264);
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葡萄(Vitis spp.)是世界重要的果树之一,在生产上广泛栽培的欧亚种葡萄(Vitis vinifera L.)特别容易感染白粉病。这种由葡萄白粉菌(Erysiphe necator Schw.)引起的真菌病害正在使葡萄产业受到严峻挑战。许多研究表明,病原菌能够通过分泌效应因子干扰植物免疫系统,从而促进对寄主细胞的侵染。尽管病原菌与植物相互作用的研究较多,但关于葡萄与葡萄白粉菌效应因子互作的研究却鲜有报道。课题组前期从葡萄白粉菌生理小种En.NAFU1中鉴定到一个效应因子EnCSEP087。为解析EnCSEP087在葡萄白粉菌侵染葡萄过程中的作用,本研究利用葡萄叶片瞬时表达的方法探究了EnCSEP087的生物学功能,并以EnCSEP087为诱饵筛选葡萄酵母文库,从中筛选到一个候选互作蛋白精氨酸脱羧酶(Arginine decarboxylase,ADC),并初步分析了其功能。取得的主要结果如下:1.RT-qPCR结果表明,葡萄白粉菌效应因子EnCSEP087基因表达量在白粉菌侵染后24 h时显著上调。酵母分泌试验证实EnCSEP087是一个分泌蛋白,亚细胞定位显示EnCSEP087位于细胞核和细胞膜上。在‘无核白’葡萄叶片中瞬时表达EnCSEP087能够促进葡萄白粉菌菌丝的生长,并且抑制了活性氧积累。2.通过酵母文库筛选,获得候选互作蛋白VviADC。利用酵母双杂交技术对效应因子EnCSEP087与葡萄精氨酸脱羧酶VviADC进行了点对点互作验证,并通过荧光素酶互补试验与双分子荧光互补试验证实了这一互作关系。3.通过瞬时转化本氏烟草叶片,观察到VviADC定位在细胞核和细胞膜上。在葡萄叶片中瞬时表达VviADC后接菌,结果表明,接菌5 d时,过量表达VviADC的‘无核白’叶片表面白粉菌菌丝的生长受到抑制,积累活性氧的细胞数量显著高于对照组。进一步测定过表达VviADC葡萄叶片中过氧化氢的含量及抗氧化酶活性,结果显示,过氧化氢含量以及过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性均提高。综上所述,本研究结果表明葡萄白粉菌效应因子EnCSEP087能够分泌到葡萄细胞中靶向葡萄精氨酸脱羧酶VviADC,从而影响葡萄免疫系统功能。
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