活血丹种质资源及其药材品质评价

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活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.为唇形科多年生草本植物。其干燥地上部分入药,药材名为连钱草(《中国药典》(2010年版)收录),主产于江苏、浙江一带,有清热解毒、利尿通淋、散瘀消肿的功能,主治胆囊炎、胆结石、肾结石等症。其种质资源系统收集评价、种质资源库的构建和药材品质评价未见报道。本文综合运用药用植物学、药用植物资源学、食品营养学、药用植物生态学知识,结合现代分析技术和分子生物学手段,在系统收集我国20省市活血丹种质基础上,从DNA分子水平揭示了不同种质的亲缘关系;并对不同活血丹种质从植物形态、营养品质和药材品质等方面进行了对比分析,此外对南京紫金山活血丹的生长发育和营养、药材品质的年积累动态进行了分析,主要结果如下:1从全国20个省市收集到58份活血丹种质,其分布北起黑龙江哈尔滨、南至云南麻栗坡(中越边境),东起上海、西至云南昆明。调查发现活血丹自然群落以无性繁殖为主,在条件适宜的小环境中有性繁殖可以成功。不同活血丹种质植株形态有一定差异,其叶片直径与叶柄长度、茎节直径显著相关,茎节数与叶柄长度显著相关,茎节长度与和芽数显著相关。2首次利用ISSR分子标记技术对分布于我国的54个活血丹居群进行了遗传多样性研究。从47条ISSR引物中筛选出18条,共检测到189个位点,其中多态性位点148个,DNA片段大小范围在200~500bp之间,总多态位点比率为78.31%,表明活血丹具有丰富的遗传多样性。3首次利用AFLP分子标记技术对对分布于我国的55个活血丹居群进行了遗传多样性研究。从64对引物组合中筛选出8对引物组合,共检测到1199个位点,其中多态性位点1184个,DNA片段大小范围在73~450bp之间,总多态位点比率为99.75%,表明活血丹具有丰富的遗传多样性。4以药材水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、总黄酮、熊果酸、齐墩果酸为药材活性成分,兼顾Cu、Pb、Cd、As、Cr等5种重金属,对分布于我国的41个活血丹居群从药材有效性和安全性两方面进行了品质评价。不同活血丹种质活性成分含量差异明显,江南江淮丘陵山地一带和云贵高原两个药材区划区域种质资源浸出物、总黄酮和熊果酸三种活性成分平均含量均显著高于全国其它药材区划区域种植资源,为优良种质资源区;不同活血丹种质中重金属元素含量差异明显,Pb含量0.025~22.300mg·kg-1;Cu平均含量15.562mg·kg-1,符合国家绿色行业标准;Cd含量0.013~1.013mg·kg-1;Cr含量0~17.75mg·kg-1;As仅在北京、广东广州、辽宁丹东和南京栖霞山、珍珠泉产地的5个居群检出,余均未检出。综合5种重金属元素含量的检测结果可见,西南地区、江淮地区活血丹种质安全性较高。5以3种基本营养成分(可溶性蛋白、可溶性糖、脂肪)、10种营养元素(4种常量元素P、K、Ca、Mg),6种微量元素(Zn、Cu、Fe、Al、Mn和B)为指标,对分布于我国的41个活血丹居群从营养品质角度进行了评价。基本营养成分南方高于北方,东部高于西部;Ca、Mg和K3种常量元素在不同活血丹居群间的差异特征基本一致;微量元素在不同活血丹居群中的表现为:zn和Cu含量变化特征一致、Fe和Al元素含量变化特征一致、Mn和B元素含量变化特征基本一致。6对南京紫金山活血丹自然分布地野生群体进行连续三年的动态观测发现:紫金山活血丹2月上旬恢复生长,3月直立生长阶段后开花、4月盛花期后种子成熟,5月底进入匍匐生长阶段,地上部分可安全越冬;一年内可分为恢复生长期、营养生长期、开花期、果实种子成熟期、匍匐生长期和枯黄期几个阶段。7同一年内,不同采收期的紫金山活血丹药材水分、浸出物含量均符合药典标准规定,总黄酮、熊果酸和齐墩果酸含量年动态整体变化趋势均呈现“升—降—升—降”的双峰型曲线,但灰分含量仅4-8月达标,因此可选择4-8月作为活血丹的最佳采收期。8同一年内,不同采收期的紫金山活血丹基本营养成分(可溶性蛋白、可溶性糖、脂肪)含量冬春季高于夏秋季;Zn、Mn、B、Fe含量冬季相对较高;Ca和Mg含量在1-2月较高、P和K含量从3月份开始到次年1月份逐渐下降。
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