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研究背景和目的:干细胞的研究推动了病理学及肿瘤学的发展。人们开始认识到肿瘤是一种干细胞疾病。就乳腺肿瘤性疾病而言,已有研究证明,乳腺上皮干细胞的存在。由于干细胞具有自我更新和多向分化潜能,处于增殖状态的细胞易受致癌物的攻击发生突变,同时干细胞是唯一能长期生存并保持增殖能力的细胞,它们有更多的突变机会,所以乳腺病变是干细胞接受两次或多次突变打击而形成的。目前还没有一个明确的乳腺上皮干细胞标记物的指标,近年来,利用Hoechst33342染色不着色或弱着色,经流式细胞仪筛选,有一群数量很少的位于边缘的细胞,叫做(side population)SP细胞。研究证明SP细胞具有干细胞的特点,可以自我更新,增殖和分化。SP表型被认为是很好的分选干细胞的方法,而SP细胞表型的产生与乳腺癌耐药蛋白(Breast Cancer resistance protein,BCRP)有关,所以有学者认为BCRP是潜在的干细胞标记物。乳腺癌伴神经内分泌分化是乳腺癌的一个特殊类型,正常乳腺组织是否存在神经内分泌细胞尚存在争议,但绝大多数研究者认为正常乳腺组织中没有神经内分泌细胞,乳腺癌中出现神经内分泌细胞是乳腺上皮干细胞在分化过程中受局部微环境和激素水平的影响发生突变,而产生了异常分化的结果。所以从干细胞多向分化的角度对乳腺癌伴神经内分泌分化进行研究,有利于对乳腺干细胞分化进行深入探讨。目前,BCRP在国内外是热点研究课题之一,我们从基因和蛋白水平检测BCRP在乳腺上皮良、恶性增生病变中的表达,用CK8、CgA标记乳腺分化细胞,来探讨乳腺上皮干/祖细胞分化及其演变规律,为揭示乳腺病变的发生及分化特点提供新的思路。方法:1.采用免疫细胞化学方法检测BCRP在乳腺癌细胞系MCF-7的表达情况。2.乳腺癌细胞系MCF-7经荧光染料Hoechst33342染色,荧光显微镜下观察SP干细胞泵出染料的功能,计数SP细胞比例,及其与MCF-7细胞表达BCRP的关系。3.采用双免疫荧光染色方法检测CK8、CgA在乳腺癌细胞系MCF-7的表达情况。4.采用免疫组化S-P法分别检测13例正常乳腺组织、16例乳腺增生症、12例非典型增生组织和48例乳腺肿瘤中BCRP的表达情况,探讨BCRP在乳腺各组织中的表达及与分化的关系。5.采用RT-PCR方法检测BCRP的mRNA在乳腺良、恶性增生疾病和癌旁组织中的表达情况。6.采用免疫组化S-P法分别检测13例正常乳腺组织、16例乳腺增生症、12例非典型增生组织和48例乳腺癌中CK8、CgA的表达情况,并对它们在乳腺良、恶性增生组织类型、分化程度上的差异以及它们各自之间的相关性进行观察总结。结果:1.乳腺癌细胞系MCF-7中BCRP的阳性表达与SP细胞计数存在显著相关性,PERSON相关分析,P<0.01。2.双免疫荧光染色检测MCF-7中有CK8与CgA共表达的细胞。3.BCRP在乳腺正常组织、增生、非典型增生、浸润癌组织中的表达逐渐增多,在正常组织和增生组织中的表达与浸润癌组织中的表达存在差异,P<0.05;检测BCRPmRNA的表达,乳腺癌组织中的阳性表达率、表达水平均显著高于癌旁组织和增生组织,P<0.01。4.CgA在乳腺正常组织和增生组织中均未见表达,在48例乳腺癌组织中有8例表达,表达率为16.7%;CK8在正常乳腺组织和乳腺增生病中全部表达,在12例非典型增生中有9例表达,阳性率为75%,48例乳腺癌中32例表达,阳性率为66.7%,其中6例原位癌4例表达,42例浸润癌28例表达,各病变之间的表达有明显差异(P=0.01)。结论:1. MCF-7中有SP细胞,BCRP与SP表型的产生有关。2.在MCF-7细胞免疫荧光双重染色中可见CK8和CgA共表达的现象,提示MCF-7中存在多向分化能力的干细胞。3. CK8作为腺腔上皮的标记物在正常乳腺组织和乳腺增生病中全部表达,在非典型增生表达下降,在乳腺癌组织中的表达减少。各组间的表达存在差异。CgA在乳腺正常组织和增生组织中都没有表达,在原位癌中出现表达,在浸润癌中增多,说明乳腺上皮干细胞在向恶性程度逐渐转化过程中,细胞向腺腔上皮方向分化减弱,分化不成熟,分化程度下降,同时有部分细胞向神经内分泌方向分化。4. BCRP在正常乳腺组织、增生组织和癌组织中表达呈逐渐增多趋势,即分化程度越低,表达越多, BCRPmRNA检测与BCRP蛋白检测结果一致。BCRP与CgA、CK8的表达阳性率相关性分析显示,BCRP与CgA的表达强相关,这些均提示BCRP可能对干细胞分化有一定的影响。