【摘 要】
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目的:慢性皮肤伤口的愈合是糖尿病等一些疾病的常发并发症,负载药物的水凝胶敷料能有效促进伤口愈合,干细胞外泌体被发现具有与干细胞类似的促修复作用。本论文的研究目的是构建干细胞外泌体/壳聚糖水凝胶复合材料,研究其促进皮肤伤口愈合的性能,为研发新的伤口修复敷料提供研究基础。方法:通过物理交联的方法制备壳聚糖水凝胶,利用SEM表征水凝胶的尺寸和形貌,利用流变仪表征水凝胶的杨氏模量,通过CCK-8法检测水凝
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目的:慢性皮肤伤口的愈合是糖尿病等一些疾病的常发并发症,负载药物的水凝胶敷料能有效促进伤口愈合,干细胞外泌体被发现具有与干细胞类似的促修复作用。本论文的研究目的是构建干细胞外泌体/壳聚糖水凝胶复合材料,研究其促进皮肤伤口愈合的性能,为研发新的伤口修复敷料提供研究基础。方法:通过物理交联的方法制备壳聚糖水凝胶,利用SEM表征水凝胶的尺寸和形貌,利用流变仪表征水凝胶的杨氏模量,通过CCK-8法检测水凝胶的生物相容性。提取SD大鼠的脂肪间充质干细胞,通过成脂和成骨分化实验鉴定细胞的干细胞分化潜能,利用免疫荧光和流式细胞仪检测间充质干细胞表面标志蛋白;通过低温超速离心法提取细胞上清中的外泌体,利用TEM表征外泌体的尺寸和形貌,利用免疫印迹法检测外泌体的标志蛋白,利用DLS（Dynamic light scattering,DLS）表征外泌体的水合粒径。通过CCK-8实验检测外泌体对细胞增殖的影响,通过划痕实验检测外泌体对细胞迁移的作用,利用成血管实验检测外泌体对HUVECs成血管的影响。构建外泌体/水凝胶复合材料,构建大鼠全层伤口模型,并进行敷料护理和伤口治疗。14 d后取伤口组织进行H＆E、Masson染色,CD 31的免疫组化等评估伤口愈合效果。结果:2%的壳聚糖溶液可以形成水凝胶,所得壳聚糖水凝胶具有可降解性和良好的生物相容性。脂肪间充质干细胞具有向成脂、成骨分化的能力,细胞标志蛋白呈CD 34-、CD 90+。脂肪间充质干细胞在第3～4代时增殖能力较强,用第3～4代细胞提取的外泌体水合粒径在200 nm之内,含有标志蛋白CD 63、TSG 101。所提取的外泌体能被细胞摄取,促进细胞的增殖、迁移以及血管形成能力。外泌体/水凝胶复合材料能在7 d内持续释放外泌体,有效促进大鼠的伤口闭合和组织再生,促进毛囊再生,抑制瘢痕的形成。结论:脂肪间充质干细胞来源的外泌体能负载到壳聚糖水凝胶中,外泌体/水凝胶复合材料通过释放外泌体,促进伤口修复,抑制瘢痕形成。
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