基于DNA步行器及离子交换信号放大策略的生物传感器用于毒素和疾病标志物的检测

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金属有机骨架材料(MOF)、金属硫化物纳米晶体以及电催化活性较好的一系列Tb和Ce共掺杂的Co P纳米材料引起了极大的关注。本文基于Co-MOF的稳定性、极佳的生物相容性以及MXene较大的比表面积、优异的导电能力,Zn S纳米晶体的离子交换特性,构建电化学和荧光生物传感器,用于赭曲霉毒素OTA、mi RNA-141和p53DNA的检测,并对所合成一系列Tb和Ce共掺杂的Co P纳米材料的电催化性能进行研究。本论文研究分为以下四个方面:(1)赭曲霉毒素A(OTA)对人类健康造成严重威胁。因此本文构建了一种基于DNA步行器的双信号电化学比率型测量平台用于赭曲霉毒素A(OTA)的检测。利用Co-MOFs和甲苯胺蓝作为电化学传感器的信号探针和内部参比探针。所构建的双信号比率型策略能够克服多种因素的变化,包括基本电极特性(即面积、形状)、探针负载密度及环境因素的影响。在OTA存在的情况下,OTA适体特异性识别OTA,释放DNA1链。在DNA四面体纳米结构上,DNA步行器启动,DNA标记的Co-MOF远离电极。因此,Co-MOFs在-1.18 V的电流信号降低,而甲苯胺蓝作为内部参比探针在-0.28 V的信号增加。这种多重扩增策略显示出优异的灵敏度,线性范围为1 fg/m L~100 ng/m L,检出限为0.31 fg/m L(S/N=3)。该传感器还可用于红酒样品中OTA含量的测定,将所测结果与商业的酶联免疫试剂盒进行比较,结果令人满意。(2)本文构建了一种基于酶驱动的串联式三维DNA机器的均相电化学传感器用于mi RNA-141的检测。在均相溶液中,利用Co-MOF作为电化学传感器的信号探针,用磁珠分别固定发夹结构的底物链MB1和MB2构建两个单步行机。在mi RNA-141存在的情况下,与阻止摆臂链特异性结合,释放摆臂链与MB1形成酶切位点。MB1 3′端标记的Co-MOF从磁珠上脱离,脱离的DNA片段又作为行走链来触发机器2,实现切口酶驱动的级联DNA机器,在均相溶液中反应完成以后,进行磁分离,在电极上对磁珠部分进行检测。这种串联式三维DNA机器显示出优异的灵敏度,线性范围为1 fmol/L~10 nmol/L,检出限为0.3 fmol/L(S/N=3)。该生物传感器可应用于真实血清样本中mi RNA-141的检测,在疾病诊断中具有重大意义。(3)本文构建了一种基于链扩增、阳离子交换(CX)触发的多重信号放大催化分子信标的荧光传感体系用于p53DNA的检测。在p53DNA存在的情况下,DNA自组装形成树枝状的DNA结构。由于DNA树枝状结构末端修饰了生物素(biotin),链霉亲和素修饰的Zn S纳米晶体成功组装在DNA树枝状结构上。Zn S纳米晶体和Ag+交换置换出大量的Zn2+,从而触发催化分子信标系统。利用DNA自组装、离子交换(CX)反应以及催化分子信标的信号放大策略来构建高灵敏p53DNA的荧光传感体系。以荧光基团羧基荧光素(FAM)为信号,荧光信号的增强和检测目标p53DNA的浓度成正比,线性范围为10 pmol/L~200nmol/L,检出限为2.34 pmol/L(S/N=3)。该生物传感器可应用于真实血清样本中p53DNA的检测,在临床诊断中具有较好的应用前景。(4)通过一步水热法合成Ce,Tb共掺杂层状氢氧化钴(Ce,Tb-Co(OH)2),随后以Na H2PO2·H2O为磷源在300℃下低温磷化得到Ce和Tb共掺杂Co P纳米片。研究Ce,Tb掺杂的含量和比例对氧析出反应(OER)性能的影响。结果表明,当Ce和Tb的掺杂量分别为Co的4%(原子比)时,催化剂的OER性能最优。当电流密度为10 m A/cm~2时,过电势为308 m V,塔菲尔斜率为59.8m V/dec,且在10 m A/cm~2电流密度下运行28小时,电压衰退率仅为0.25 m V/h,催化剂耐久性优异。
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