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目的:探讨SDF-1/CXCR4轴在胃癌转移中的相关作用机制,为胃癌转移的防治提供重要理论依据。方法:(1)SDF-1/CXCR4在胃癌中的表达分析。选择2016年3月-2018年3月胃癌患者290例作为对象,取病灶组织、癌旁组织及正常胃组织。免疫组织化学法测定CXCR4蛋白表达;实时荧光定量PCR技术测定CXCR4 mRNA水平;查阅病历资料,分析病理下CXCR4及CXCR4、VEGF-C、MMP-2 mRNA水平并完成相关性分析。(2)SDF-1/CXCR4在胃癌不同细胞系中的表达分析。(1)体外构建稳定表达CXCR4的胃癌细胞HS-764T细胞系,分别加入趋化因子完成体外趋化实验,并检测CXCR4不同表达水平下,胃癌细胞对SDF-1/CXCR4的趋化和侵袭反应;(2)上调CXCR4和体外侵袭实验,确定CXCR4表达与胃癌体外侵袭能力的关系;(3)建立裸鼠人胃癌转移瘤动物模型,形成裸鼠原位肿瘤及转移瘤,测定上调CXCR4表达后,胃癌体内体外侵袭和转移能力的变化。(3)SDF-1/CXCR4在胃癌侵袭转移中机制。取CXCR4-HS-746T与HS-746T细胞,构建CXCR4过表达细胞系为基础,上调CXCR4表达;流式细胞仪检测细胞凋亡、周期及细胞内钙离子浓度水平;采用实时荧光定量PCR法测定不同细胞中VEGF-C、MMP-2 mRNA表达水平;采用Western Blot测定VEGF-C、MMP-2相关蛋白表达水平并完成APK信号通路蛋白ERK磷酸化测定。结果:第一部分:(1)胃癌组织中CXCR4、VEGF-C、MMP-2蛋白阳性率均高于癌旁组织和正常组织(P<0.05);癌旁组织与正常组织CXCR4、VEGF-C、MMP-2蛋白阳性率无统计意义(P>0.05);(2)胃癌组织中CXCR4、VEGF-C、MMP-2阳性率及CXCR4mRNA与TNM肿瘤分期及分化类型具有统计意义(P<0.05);(3)胃癌组织中CXCR4 mRNA水平均高于癌旁组织和正常组织(P<0.05);(4)胃癌组织中CXCR4 mRNA水平与TNM肿瘤分期及分化类型具有统计意义(P<0.05);(5)SPSS Pearson相关性分析结果表明:胃癌组织中CXCR4蛋白表达水平与VEGF-C、MMP-2表达水平均呈正相关性(P<0.05)。第二部分:(1)选择PEGFP-C1-CXCR4和p EGFP-C1重组子,对其进行酶切,选择使用的酶分别为Eco RI和HindⅢ,酶切后可见CXCR4 c DNA片段,大小为1.2kb,p EGFP-C1 c DNA片段,大小为4.7kb,说明CXCR4包含在PEGFP-C1-CXCR4中;采用p SUPER上的T7位点进行测序鉴定,结果证明该质粒所携带基因片段为目的CXCR4 c DNA;(2)荧光显微镜下可见细胞为圆形,且存在绿色荧光,干扰率>60.0%,说明转染成功;(3)Western Blot法测定结果显示:C组p EGFP-C1-CXCR4质粒转染的人胃癌细胞系HS-746T细胞中CXCR4蛋白水平高于A组和B组(P<0.05);(4)A组和B组细胞干预后细胞的侵袭和迁移细胞数量无统计意义(P>0.05);C组胃癌细胞经转染后细胞的迁移和侵袭数量均高于A组和B组(P<0.05);在SDF-1α的趋化作用下,C组细胞具有更强的迁移能力(P<0.05);加入CXCR4抗体后,三组细胞迁移能力受到影响(P<0.05);(5)HS-746T细胞接种后平均肿瘤质量为(2.98±0.43)g低于CXCR4-HS-746T细胞(4.64±0.51)g(P<0.05);分离裸鼠原位肿瘤和肺脏,行HE染色,结果表明:CXCR4-HS-746T细胞肝脏、肺脏组织中均发现转移瘤,而HS-746T细胞中位发生转移瘤,说明通过调节CXCR4表达能抑制体内成瘤后的侵袭与转移。第三部分:(1)CXCR4-HS-746T比率为98.3%与HS-746T细胞90.1%比较无统计意义(P>0.05);CXCR4-HS-746T与HS-746T干预后细胞周期发生变化;(2)CXCR4-HS-746T细胞干预后10min、15min、20min平均荧光强度均高于HS-746T细胞(P<0.05);(3)CXCR4-HS-746T细胞中VEGF-C、MMP-2 mRNA水平高于HS-746T细胞(P<0.05);Western Blot结果表明:CXCR4-HS-746T细胞中VEGF-C、MMP-2蛋白水平高于HS-746T细胞(P<0.05);(4)经SDF-1α作用15min、30min,ERK与AKT都发生了磷酸化,且CXCR4-HS-746T细胞磷酸化水平更高。结论:(1)CXCR4在胃癌组织中呈高表达,且与分化程度、TNM分期存在相关性,在胃癌的发生、侵袭和转移过程中发挥重要作用;(2)通过上调CXCR4能构建稳定的胃癌HS-746T细胞模型,而SDF-1α能提高胃癌细胞的迁移、转移及体内成瘤能力,说明SDF-1/CXCR4轴能直接参与胃癌转移;(3)CXCR4过表达能激活细胞钙离子内流,加速胃癌的侵袭和转移,可能与MAPK/ERK及PI3K/AKT信号调节有关,有望成为胃癌新的治疗靶点。