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目的通过网络药理学方法对中药经典组方生化汤(Shenghua Decoction,SHD)进行研究,确证SHD中主要活性成分及作用靶标,探讨其多成分-多靶标-多通路治疗产后恶露不绝(Postpartum Lochia,PL)的作用机制,并选取PI3K/AKT/NF-κB信号通路进行动物实验验证。方法通过TCMSP、TCMID和TCM@taiwan数据库检索SHD单体成分,并以“OB≥30%、DL≥0.18”筛选SHD活性化合物及作用靶标,构建SDH活性化合物-靶标网络图,进行拓扑学参数分析。并根据TTD和OMIM数据库中与PL相关的靶标,筛选SHD治疗PL的作用靶标,通过对靶标的基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路分析,探讨SHD治疗PL的作用机制。采用动物实验进行验证:分娩后第1天的60只SD大鼠,按随机数字表法分为空白组(Control)、模型组(Model)、生化汤组(Model+S)、抑制剂组(Model+LY)、生化汤+抑制剂组(Model+LY+S),共5组,每组12只。其中除空白组不进行病原菌子宫内接种,其余4组均进行病原菌子宫内接种,然后建立PL模型。产后第4天,Control组给予5ml/kg三蒸水灌胃,同时10mg/kg生理盐水腹腔注射;Model组同Control组;Model+S组给予生化汤5ml/kg灌胃,同时10mg/kg生理盐水腹腔注射;Model+LY组5ml/kg三蒸水灌胃,同时腹腔注射注射PI3K/AKT抑制剂LY294002 10mg/kg;Model+LY+S组5ml/kg生化汤灌胃同时腹腔注射LY294002 10mg/kg,各组均每日上午8时给药一次,连续7天。ELISA对大鼠血清肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)水平进行检测;HE染色对子宫形态进行分析;免疫荧光、Western Blot检测大鼠子宫组织PI3K/AKT/NF-κB信号通路蛋白表达情况。结果1、本研究获得SHD活性成分120种,预测成分作用靶标共236个,PL相关靶标1053个,筛选出SHD与PL共有靶标84个,度值较大的靶标为TP53(61)、JUN(60)、AKT1(60)、FSR1(53)、PTEN(49)和MTOR(49)。2、通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路进行动物实验验证,子宫大体形态及HE染色结果显示,与Control组相比,Model组大鼠子宫肿大,重量增加,子宫壁增厚,宫腔内可见大量脓汁样液体。镜下见子宫内膜连续性中断,上皮变性、坏死,间质出血、水肿,大量炎细胞浸润。经SHD治疗后,Model+S组子宫内膜偶有连续性中断,上皮损伤较轻,炎性细胞较少。Model+LY组与Model+LY+S组子宫损伤程度较Model组轻,较Model+S组重;ELISA结果显示,与Control相比,Model组血清TNF-α的水平显著升高(P<0.01),经SHD治疗后,与Model组比较,Model+S组血清TNF-α的水平显著降低(P<0.01);免疫荧光法结果显示,与Control相比,Model组p-PI3K、p-AKT表达降低,而经SHD治疗后,与Model组比较,Model+S组p-PI3K、p-AKT表达升高,Model+LY+S组与Model+LY组的p-PI3K、p-AKT水平较Model+S减低;Western Blot结果显示,Model+S组与Control组p-AKT蛋白表达量较Model呈显著增高(P<0.01),各组间AKT表达无明显差异。Model+S组与Control组p-NF-κB p65蛋白表达量较Model组显著降低(P<0.01),Model+LY组和Model+LY+S组与Model组相比,p-NF-κB p65蛋白表达量减低(0.05<P<0.01)。SHD显著升高PL大鼠模型中PI3K、AKT、NF-κB p65蛋白磷酸化水平(P<0.01),显著降低血清TNF-α表达水平(P<0.01)。结论通过网络药理学的方法所获得的84个靶标,可能是SHD治疗PL的潜在靶标,其作用机制可能与PI3K/AKT、MAPK、HIF-1和FXO等信号通路有关。通过选取的PI3K/AKT/NF-κB信号通路进行动物实验验证,表明该通路是SHD治疗PL的潜在分子机制,为深入探讨SHD通过多成分-多靶标-多通路治疗PL机理奠定了研究基础。