目的： Hedgehog家族是一类分泌信号蛋白,主要调节胚胎中多种器官和组织的形成,并且发现与成人组织干细胞增殖、多种癌症的形成有关。在小鼠中一共有三种hedgehog基因,分别是Sonic hedgehog(Shh)、Indian hedgehog(Ihh)和Desert hedgehog(Dhh),由这三种基因编码而成的信号都激动同样一条信号级联放大通路。当Ptc和Hh结合以后,解除对Smo的抑制作用,促使Gli蛋白与Costal2，Fused,和Fused的抑制因子作用后与微管形成大分子复合物,使得全长Gli蛋白进入核内激活下游靶基因转录。已知有研究表明Shh与许多血管生成因子有关能促进VEGF的表达,参与血管的生长,对急、慢性心肌缺血模型有显著治疗作用,并且在小鼠糖尿病模型中参与皮肤伤口的愈合。鉴于Shh对炎症以及血管的作用,使得我们希望探索它在糖尿病心肌病(DCM)中的作用。 方法： 1、选用7周龄的C57/B6小鼠,腹腔注射佐链脲菌素(STZ)诱导小鼠血糖达到280mg/dl成为1型糖尿病小鼠模型。分别使用7周龄正常小鼠(N7)、8周龄高血糖小鼠(D8),同龄正常对照组(N8);12周龄DCM小鼠(D12),同龄正常对照组(N12);20周龄DCM小鼠(D20)以及同周龄正常对照组(N20),取心肌组织做免疫组化检测心肌Shh的蛋白表达,DAB染色。光镜下观察各组小鼠心肌切片Shh表达情况,用图象分析系统检测阳性细胞光密度。 2、各组小鼠取心肌组织,用Trizol法提取心肌总RNA,采用荧光定量PCR技术,检测小鼠心肌Shh mRNA相对量的表达。以GAPDH为内参,与同龄正常小鼠组作比较。 3、各组小鼠取心肌组织,提取总蛋白,用Brandford法测定组织匀浆上清液中的总蛋白的含量,以GAPDH为内参,用Western blotting法检测组织匀浆上清液中的Shh mRNA的相对表达量。 结果： 1、腹腔注射STZ的小鼠血糖较同周龄正常小鼠明显升高,对比同周龄小鼠体重下降明显。糖尿病小鼠每日饮水增加约10ml,每日摄入食物量明显增多,尿量亦相应增加。D12组与D20组的心肌肥厚指数HW/BW(g/g)与正常同周龄小鼠相比具有统计学差异； 2、心肌组织切片免疫组化检测可见随着小鼠周龄的增大,小鼠心肌的shh的表达呈下降趋势；D12、D20组小鼠心肌的阳性表达明显较同周龄正常小鼠减少,甚至无阳性表达。图象分析系统检测阳性细胞光密度,显示正常小鼠随着周龄的增大心肌Shh蛋白的表达呈下降趋势；而同D12组、D20组心肌表达明显低于同周龄正常小鼠。 3、以GAPDH作为内参照,检测小鼠心肌细胞Shh mRNA表达。PCR产物在紫外灯下观察,可见内参条带清晰,正常小鼠条带明亮度依次为:N7＞N8＞N12＞N20。糖尿病小鼠条带明亮度依次为:D8＞D12＞D20,并且明显亮度较同周龄小鼠弱。以图象分析系统分析,得到正常小鼠随着周龄的增大,其条带的相对灰度值呈明显降低趋势；糖尿病小鼠的条带相对灰度值随周龄的增大呈明显降低,并且较同周龄正常小鼠灰度值明显低。 4、以GAPDH作为内参照,WB法检测小鼠心肌Shh蛋白表达。以图象分析系统分析,得到正常小鼠随着周龄的增大,其条带的相对灰度值呈明显降低趋势；糖尿病小鼠的条带相对灰度值随周龄的增大呈明显降低,并且较同周龄正常小鼠灰度值明显低。以图象分析软件分析,得到小鼠心肌的Shh的蛋白相对量。 结论： 糖尿病诱导心肌病的发生,使得心肌肥厚。正常小鼠心肌Shh的表达随着周龄的增大呈降低趋势,而糖尿病小鼠心肌中Shh蛋白的表达明显低于正常同周龄小鼠。提示,心肌Shh的表达可能在糖尿病心肌病中具有一定意义。