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卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首位,五年存活率仅在30%,常规治疗方法难以提高其五年存活率。由于深居盆腔,起病隐匿,且易复发,临床发现多属晚期,因此,特异的早期诊断方法和残余病灶的及时清除是改善预后的关键环节。对人卵巢癌细胞相关抗原特异的双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)在临床上有着广阔的应用前景。其优点是副作用小,特异性强,制备简单。基因工程法制备BsAb是随着基因工程抗体技术的发展,在小分子抗体的基础上发展起来的。作为手术、放疗、化疗等传统方法的补充,其作用在于消除亚临床病灶,减少乃至消灭肿瘤的复发和转移。 本实验室已利用基因工程技术成功构建了抗人卵巢癌×抗人CD3双特异性单链抗体(命名为BHL-I),并在大肠杆菌中得到了高效表达。本文则在此基础上对该双特异性抗体的生物学活性进行了研究,这将为其进入临床研究提供必要的前提和保证。 在获得纯化、复性的BHL-I样品后,首先采用ELISA方法对其抗原结合活性进行了测定,以OD490值比阴性对照高出2.5倍为活性合格的标准,在此基础上对活性合格样品进行了一系列实验研究其生物学活性。 通过流式细胞术进一步验证了BHL-I与两种相应抗原的结合活性,以及激活T细胞发挥效应功能的作用。结果显示,BHL-I能够有效激活T细胞,能够刺激T细胞分泌IL-2,其培养上清用于培养IL-2依赖细胞株CTLL-2能够使其增值。另外,BHL-I不仅与T细胞及卵巢癌细胞(SKOV3)具有良好的结合活性,而且与其它无关肿瘤细胞的结合活性明显低于与SKOV3细胞的结合活性,说明它具有较好的靶向性及特异性。进一步通过体外杀伤试验验证了BHL-I介导的效应细胞裂解靶细胞的能力,结果也非常理想。杀伤活性与抗体的浓度、作用时间及效靶比有关,在最适条件下,杀伤率最高可达87%。另外,IL-2、CD28单克隆抗体等联合应用能有效提高杀伤活性。 通过荷卵巢癌裸鼠的放射免疫显像试验研究了BHL-I的体内分布及全身清除情况,结果表明,放射性标记的抗体在肿瘤组织中有特异性摄取。初步的体内试验也验证了双特异性抗体具有抑制肿瘤生长的作用。 总之,研究结果对于BHL-I的生物学及药效学活性进行了评价,对其临床研究奠定了基础。