论文部分内容阅读
目的：中枢神经系统需充分的血液供应且对缺血性损害异常敏感，脑缺血后血管再生即从原已存在的血管中长出新的毛细血管，对脑缺血可能具有非常重要的神经功能恢复和缺血性神经保护作用。内源性血管再生反应取决于组织中促血管再生因子(pro-angiogenic factors)和抗血管再生因子(anti-angiogenic factors)之间的平衡。本研究探讨兔MCAO型局灶脑缺血后脑组织VEGF、内皮抑素(ES)蛋白及mRNA基因表达的变化基础上，观察一氧化氮(NO)合成底物左旋-精氨酸(L-Arg)对兔局灶脑缺血后血管再生和脑细胞凋亡的影响，外源性VEGF对兔局灶脑缺血后缺血脑组织血管再生的作用以及NO对局灶脑缺血后VEGF表达的影响等。材料和方法：80只新西兰白兔按实验要求随机分组，L-arginine和VEGF分别静脉途径和右侧侧脑室注射给药，对照组仅给予同体积生理盐水。兔以戊巴比妥钠(30mg／kg体重)静脉麻醉，固定于特制的兔手术台，经左眶入路电凝阻断兔大脑中动脉建立兔MCAO型局灶脑缺血模型。酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化、荧光RT-PCR等方法分别测定脑组织VEGF、ES蛋白和基因表达，原位杂交检测ESmRNA表达，流式细胞仪定量分析细胞凋亡率的变化，CD34免疫组化分析脑组织微血管密度(MVD)，脑组织含水率评价脑水肿。结果：与对照组相比，局灶脑缺血后ES蛋白、mRNA表达均明显增加(分别P＜0.01，P＜0.05)，同时缺血脑组织VEGF也明显增加(P＜0.05)。缺血5d后，VEGF组脑组织MVD明显高于对照组(P＜0.01)，脑组织含水率也高于对照组(P＜0.05)。L-arginine组脑细胞凋亡率明显减少(P＜0.01)，同时脑组织MVD却明显增加(P＜0.01)。兔MCAO后应用L-arginine增加缺血脑组织VEGFmRNA表达(P＜0.05)，同时减轻脑水肿。结论：血管再生在脑缺血后神经保护中发挥重要作用，因此触发缺血区新血管的形成是脑缺血治疗的一种重要策略。然而血管再生又是一个复杂的过程，需要多种促血管再生因子和抗血管再生因子的共同参与和调解。本文首次证实缺血不仅诱导脑组织VEGF表达增加、而且缺血能够上调ES蛋白及基因表达，而上调的ES可能在脑缺血后的血管再生中具有重要作用。外源性VEGF、NO能促进缺血脑组织血管再生并具有明显的神经保护作用。NO合成底物L-arginine增加缺血脑组织VEGF的表达同时减轻脑水肿，说明血管活性因子NO和VEGF在脑缺血中可能相互影响，提示联合应用NO合成底物和VEGF治疗脑缺血可能会起到更好的协同作用。