[目 的]三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)是指一类特殊的乳腺癌分子分型,即ER(雌激素受体)、PR(孕激素受体)及HER2(人类表皮生长因子受体2)均为阴性。TNBC与其他分子分型的乳腺癌相比恶性程度更高,表现为复发转移率高,侵袭性强,进展快以及预后差等。我们期望找到在TNBC中特异性表达的基因,并揭示其功能,为TNBC特异性靶向药物的研发提供线索。[方 法]1.通过生物信息学技术,对TCGA数据库中不同分子分型的乳腺癌进行RBMS1基因的表达分析,同时对RBMS1进行生存分析和GSEA分析;2.构建RBMS1-shRNA载体,利用慢病毒转染体系在MDA-MB-231和HCC1937两株TNBC细胞系中敲降RBMS1,并通过反转荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)实验检测目的基因敲降效率;3.待RBMS1敲降后的MDA-MB-231细胞系和HCC1937细胞系稳转后,进行Transwell实验检测敲降RBMS1基因对细胞迁移、侵袭能力的影响;4.通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测敲降RBMS1对细胞系中上皮间充质转化(EMT)相关标志物表达水平的影响;5.利用流式细胞分析技术检测敲降RBMS1对细胞凋亡和细胞周期的影响,利用MTS法检测细胞增殖情况;6.在非TNBC细胞系MCF7中过表达RBMS1,利用qRT-PCR检测过表达效率后进行Transwell细胞迁移和侵袭实验;7.将RBMS1敲降MDA-MB-231细胞送至公司进行转录组测序,数据返回后进行相关分析:确认敲降效率,基因功能富集分析,分析下游差异表达基因等;8.qRT-PCR实验验证MDA-MB-231细胞系中RBMS1下游差异表达基因的变化。[结 果]1.生信分析和实验室结果均提示RBMS1基因在TNBC中特异性高表达,在非TNBC细胞系中低表达。生存分析提示RBMS1的高表达和患者不良预后相关。GSEA分析提示RBMS1和EMT过程相关。2.qRT-PCR 实验证实 RBMS1-shRNA 在MDA-MB-23 1 和 HCC1937 细胞系中能够显著抑制RBMS1 mRNA的表达(P<0.001);蛋白免疫印迹实验提示RBMS1敲降MDA-MB-231细胞系中RBMS1的蛋白表达水平明显降低;3.敲降 RBMS1 后,MDA-MB-231 细胞(P<0.001)和 HCC1937 细胞(P<0.05)的迁移能力和侵袭能力显著降低;4.在MDA-MB-231细胞中敲降RBMS1后,qRT-PCR实验提示ZEB1(P<0.001)和Fibronectin(P<0.01)表达降低,蛋白免疫印迹实验提示E-Cadherin表达水平升高,N-Cadherin、ZEB1和Vimentin的表达水平降低;在HCC1937细胞中敲降RBMS1后,qRT-PCR实验提示E-Cadherin表达水平升高(P<0.05),细胞免疫荧光实验提示N-Cadherin表达减少;5.细胞流式分析结果提示RBMS1敲降组MDA-MB-231细胞凋亡比例以及细胞周期G1/S/G2各时期的比例与对照组相比没有显著差异,MTS法实验结果显示敲降RBMS1对细胞增殖无影响(P>0.05);6.qRT-PCR实验证实RBMS1在MCF7中能够有效过表达(P<0.001),且过表达RBMS1后,MCF7细胞的迁移能力和侵袭能力显著增强(P<0.001);7.RBMS1敲降MDA-MB-231转录组数据证实RBMS1基因的表达被抑制(P<0.01),基因功能富集分析提示RBMS1与EMT过程相关;8.转录组数据分析得到下游差异表达基因CST1、CST2、CST4、IL-1B、ITGA10以及SPDEF等,实验室qRT-PCR实验证实敲降RBMS1后,CST1、CST2、CST4、SPDEF、ITGA10 的 mRNA 表达水平降低。[结 论]1.RBMS1在三阴性乳腺癌中特异性高表达,RBMS1高表达与患者不良预后相关;2.RBMS1促进乳腺癌细胞迁移、侵袭能力;3.RBMS1通过EMT信号途径影响TNBC的迁移、侵袭过程。RBMS1的表达与 E-Cadherin 表达呈负相关,与 N-Cadherin、Fibronectin、ZEB1、Vimentin表达呈正相关;4.RBMS1 与 CST1、CST2、CST4、IL-1B、ITGA10 以及 SPDEF 等下游差异表达基因具有相关性。