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【目的】 研究与survivin基因表达相关的lncRNA沉默后对survivin基因表达以及细胞增殖、周期和凋亡的影响,以及探讨其中可能的分子作用机制。 【方法】 分别下调和上调Hela细胞中survivin基因的表达,检测lncRNA的表达量,筛选出与survivin 基因表达有相关性的lncRNA,分别设计下调这些lncRNA的siRNA转染至HeLa细胞中,并设置对照组。通过实时荧光定量PCR检测survivin基因的RNA以及lncRNA表达水平;MTT试验和平板克隆形成试验检测细胞增殖情况,PI染色后流式细胞术检测转染siRNA 48 h后的细胞周期的变化,western blot检测转染siRNA 48 h后survivin蛋白、周期相关蛋白、HDAC2的表达情况。 【结果】 1. 成功设计合成了 survivin 基因过表达质粒及下调 lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET的siRNA。 2. RT-qPCR检测表明:lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET会随着survivin基因的表达改变而发生相应变化,但分别下调lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET的表达,survivin基因RNA水平均表现出不同程度的上调,(P<0.01)。 3. MTT试验结果表明:下调lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET的表达后,抑制了HeLa细胞的生长能力,(P<0.05)。 4. 平板克隆实验结果表明:下调 lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET的表达后,抑制了HeLa细胞的增殖能力,(P<0.01)。 5. 流式细胞仪检测细胞周期结果表明:下调 HeLa 细胞中 lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET表达后,S期细胞比例明显增加,即HeLa细胞发生S期阻滞,(P<0.01)。 6. DAPI染色和流式细胞术结果表明:下调HeLa细胞中lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET表达后,对Hela细胞的凋亡未见明显影响。 7. Western blot结果表明:下调lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET的表达,p53、p21和S期相关蛋白CDK2和CyclinA2的表达量均出现不同程度的下调,HDAC2表达出现不同程度上调。 【结论】 1. lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET在Hela细胞中的表达是与survivin基因表达呈正相关,而下调分别lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET后,survivin基因表达增加; 2. 分别下调Hela细胞中lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET的表达都会影响细胞的生长、增殖,阻滞细胞周期于S期,却对细胞凋亡没有明显影响; 3. 下调lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET可能通过下调p53基因的表达,导致S期相关蛋白CDK2和CyclinA2的表达量减少,细胞周期发生S期阻滞; 4. 下调lncRNA AFAP1-AS1、TUG1、CARLo-5、LET可能通过增加HDAC2的活性,降低p21蛋白表达而参与组蛋白修饰过程。