【摘 要】
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该研究首次将核酸免疫技术应用于转基因植物检测研究中,探讨一种核酸免疫法制备抗CpTI抗体来检测基因表达的方法,并与传统的蛋白免疫方式制备抗体进行比较.该研究通过限制酶
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该研究首次将核酸免疫技术应用于转基因植物检测研究中,探讨一种核酸免疫法制备抗CpTI抗体来检测基因表达的方法,并与传统的蛋白免疫方式制备抗体进行比较.该研究通过限制酶将CpTI基因片段从载体pBlueL3上切下,插入真核表达载体pcDNA3.1,构建了用于核酸免疫的真核表达载体pcDNA3.1-CpTI;质粒大量提取和纯化后,通过肌肉注射的方法免疫BALB/c小鼠,基因表达产物刺激小鼠机体产生免疫反应,从而获得了抗CpTI蛋白的抗体.经间接ELISA法检测,抗体能力GST-CpTI、CpTI蛋白特异性结合,其相关系数达到显著水平,效价>1:800.鉴于没有现在的抗CpTI抗体与我们获得的核酸免疫抗体进行比较试验,该研究同时进行了CpTI基因的细菌表达与蛋白纯化用于抗体制备.考虑到CpTI为小分子多肽,稳定性较差,为增加CpTI蛋白的免疫原性,该研究采用了CpTI与谷胱甘肽GST融合的pGEX表达系统.通过限制酶切割将CpTI基因片段插入载体pGEX-4T-3,构建了细菌表达载体pGEX-4T-3-CpTI.对其进行细菌表达后,利用Glutathione sepharosr 4B亲和柱纯化获得GST-CpTI融合蛋白,免疫动物后制备了相应的抗GST-CpTI融合蛋白抗体.该研究初步建立一种核酸免疫法制备抗CpTI抗体,并用于转CpTI基因水稻基因表达产物检测的方法.鉴于目前制备的核酸免疫抗体效价仍不高,,以及转基因水稻中存在本底等问题,需要进一步深入研究.
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