论文部分内容阅读
目的：初步探讨骨髓间充质干细胞对活体动物增生性瘢痕的影响，以探讨间充质干细胞用于增生性瘢痕防治的可行性。方法：以6只成年健康雄性新西兰白兔为实验动物，于新西兰白兔双耳腹侧分别建立大小为6mm的圆形增生性瘢痕模型，每只兔耳共6个增生性瘢痕模型。随机选择6只兔设立左耳为实验组（共36个创面）,右耳为对照组（共36个创面）：实验组分别于上皮化完成后第2日（术后20天左右）和上皮化完成后第10日（术后30天左右），取第5代经BrdU标记后生长良好的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs）于增生性瘢痕软骨膜上层进行环形注射（1×105/0.2ml）。对照组在上述相应时间点注射相同剂量的PBS缓冲液；实验组与对照组分别于第2次细胞移植后7天（术后37天左右）取材。记录各实验组增生性瘢痕的大体外观，HE及VG染色观察其组织学变化，实验组行免疫荧光染色对移植的干细胞进行示踪，实时荧光-聚合酶链式反应(Real Time-PCR,RT-PCR)检测两组增生性瘢痕组织中核心蛋白多糖（decorn，DCN）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的mRNA表达变化情况，酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，Elisa）检测增生性瘢痕组织中DCN、TGF-β1、I型胶原及III型胶原的蛋白表达情况。结果：术后37天对照组瘢痕增生明显，色红质硬，突出于皮面；实验组瘢痕组织体积缩小，变平变软，色泽轻度变浅。HE染色结果：对照组基底层细胞排列紊乱，镜下见大量成纤维细胞增殖及炎性细胞浸润，成纤维细胞排列无序或以旋涡状排列；实验组基底层细胞排列较整齐，真皮浅层成纤维细胞数量明显减少，排列较整齐，结缔组织增生减少，炎性细胞减少。VG染色结果：对照组镜下见大量胶原纤维沉积，胶原纤维粗大，排列杂乱无序；实验组胶原沉积减少，胶原纤维之间排列疏松而规整。通过免疫荧光染色观察到第二次细胞移植后7天，瘢痕组织内仍可以发现有存活的BMSCs。RT-PCR结果：实验组TGF-β1mRNA表达量较对照组明显降低，DCNmRNA表达量明显升高，结果均有统计学意义（P＜0.01）。Elisa结果：实验组TGF-β1胶原蛋白表达量较对照组降低，DCN蛋白表达量较对照组升高，结果均有统计学意义（P＜0.05）；实验组I型、III型胶原蛋白表达量较对照组降低，结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论：兔耳创面在上皮化形成后行异体BMSCs移植，可以上调DCN的表达，下调TGF-β1的表达，减少I型胶原和III型胶原的合成及细胞基质蛋白的沉积，促进胶原排列有序，发挥抑制增生性瘢痕形成的作用。