细胞凋亡,或程序性细胞死亡,在生物发育和维持正常生理活动过程中起着十分重要的作用。细胞凋亡是一种高度有序的程序性死亡的方式,它主要通过两条途径来启动:死亡受体途径和线粒体介导的途径。因此,激活细胞凋亡途径成为抗癌药物研究的新热点,目前已成为抑制恶性肿瘤增殖的一种治疗手段。白藜芦醇(RV),是在红葡萄皮以及其他食品中发现的一种天然植物多酚化合物,近年来的越来越多的研究证明,白藜芦醇具有抑制多种肿瘤细胞生长和诱导其细胞凋亡的能力。虽然前人付出了很多努力研究白藜芦醇的抗肿瘤机制,但是白藜芦醇诱导人肺腺癌(ASTC—a-1和A549)细胞凋亡的作用机制仍然不清楚。　　 本文第一章绪论部分总结了凋亡信号转导通路的研究现状,概述了白藜芦醇诱导凋亡的机制,荧光能量共振转移(FRET)等荧光技术的基本原理及其应用,同时说明了本课题研究的目的和意义。　　 本文的实验工作主要分为两个部分:　　 在第一部分的实验工作中,首次采用激光扫描共焦显微成像、FRET受体漂白技术和荧光底物检测技术在人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)中检测了白藜芦醇诱导细胞凋亡中caspases的活化情况。我们的实验结果表明:1)白藜芦醇诱导caspase-9和caspase-3的活化而没有诱导caspase-8的活化；2)白藜芦醇诱导AIF从线粒体释放并转位到细胞核；3)AIF在白藜芦醇诱导的细胞凋亡中起主要作用,而caspase-9及caspase-3在白藜芦醇诱导的细胞凋亡中只起部分作用；4)线粒体途径参与了白藜芦醇诱导的细胞凋亡(线粒体膜电位的下降)。　　 在第二部分的实验工作中,我们主要研究了Bax和Bak在白藜芦醇诱导的人肺腺癌(ASTC—a—1和A549)细胞凋亡中所起的作用。我们的实验结果表明:白藜芦醇诱导了线粒体膜电位的下降、caspase-9和caspase-3而不是caspase-8的活化及AIF而不是cytochrome c和Smac/Diablo从线粒体的释放；AIF干扰后能较大程度的抑制白藜芦醇诱导的细胞凋亡,而caspase-8的抑制剂对其没有作用,caspase-9和caspase-3的抑制剂只能较少程度的抑制白藜芦醇诱导的细胞凋亡,这就表明caspase非依赖的AIF途径在白藜芦醇诱导的细胞凋亡中起主要作用。而且,白藜芦醇处理细胞后,显著的诱导了Bak而不是Bax的活化。而且,干扰Bak而不是干扰Bax后,几乎完全抑制了白藜芦醇诱导的细胞死亡、线粒体膜电位的下降以及AIF的释放,这就表明白藜芦醇诱导的细胞凋亡中优先活化了Bak而不是Bax。还有,白藜芦醇诱导Mcl-1的表达量有明显下调,而且,Mcl-1干扰后,只是稍有加强白藜芦醇诱导的Bak的活化。有趣的是,将Bim干扰之后能显著地抑制白藜芦醇诱导的细胞活力的下降,而将Puma和Noxa干扰后对其没有影响,表明Bim在白藜芦醇诱导的细胞凋亡中的重要作用。总之,白藜芦醇诱导的ASTC-a-1和A549细胞凋亡主要是通过Bak而不是Bax介导的AIF依赖的内源性的凋亡途径,而且,在该凋亡途径过程可能是Bim而不是Puma和Noxa给触发ASTC-a-1和A549细胞凋亡提供了动力。