论文部分内容阅读
林可胺类抗生素是从链霉菌发酵液中提取出的一类抗生素,是高脂溶性的碱性化合物。林可胺类抗生素主要包括林可霉素、克林霉素和吡利霉素。林可胺类抗生素的抑菌机制是作用于敏感菌核糖体的50S亚基中的23S rRNA,阻止肽链的延长,从而抑制细菌细胞蛋白质的合成。对大多数革兰氏阳性菌和某些厌氧菌有良好的抗菌作用。但随着人医和兽医临床用药的增多,细菌也开始出现对林可胺类抗生素耐药的现象。细菌对林可胺类抗生素的耐药机制有两种,第一种耐药机制主要是由erm基因介导,通过对核糖体23S rRNA腺嘌呤N6进行二甲基化修饰,引起药物作用靶点发生改变而引起细菌耐药,产生这种耐药机制的细菌对林可胺类-大环内酯类-链阳菌素B(MLSB)均耐药;第二种耐药机制是产生能使林可胺类抗生素腺苷化的酶,导致林可胺类抗生素失活而引起细菌耐药。目前为止,引起细菌产生第二种耐药机制的基因lnu(A)[之前称之为lin(A)]、lnu(B)、lnu(C)、lnu(D)、lnu(E)等相继被报道。这些耐药基因出现,表明细菌对林可胺类抗生素的耐药性比较普遍,也提示我们细菌中也可能存在其他的林可霉素耐药基因亚型。本研究在猪源粪肠球菌E531全基因组测序的基础上,经序列分析、耐药基因克隆、药敏实验、UPLC-MS/MS、反向PCR、I-CeuIPFGE、southern blot等试验方法,鉴定了林可霉素耐药基因新亚型,命名为lnu(G)。lnu(G)与已报道的lnu(A)～lnu(F)基因的氨基酸序列同源性存在着不同程度的同源性(31%～76%)。耐药基因克隆及药敏试验显示,与对照菌(E.faecalis JH2-2+pAM401空载体)相比,含有lnu(G)耐药基因的粪肠球菌(E.faecalis JH2-2+PAM401+lnu(G))对林可霉素的耐药性提高了 4倍。UPLC-MS/MS试验显示,lnu(G)编码的蛋白能催化林可霉素腺苷化。反向PCR及测序证实,lnu(G)位于一个长度为4.75kb的Tn544家族的转座子上,命名为Tn6260。该转座子与Tn554家族的其他转座子相比,均含有tnp(A)、tnp(B)、tnp(C)结构。I-CeuI-PFGE及Southern杂交试验显示,Tn6260位于肠球菌染色体上。lnu(G)基因在猪源肠球菌中的分布表明,部分菌株lnu(G)基因的水平转移与转座子Tn6260存在一定的关联。综上所述,本研究在猪源肠球菌上鉴定了一个林可霉素耐药新亚型lnu(G),该基因能催化林可霉素腺苷化,使细菌对林可霉素的耐药性提高4倍,并且该耐药基因由转座子Tn6260携带,位于染色体上。