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1研究背景冠心病是一种严重危害人类健康的心血管疾病,目前具有较高的发病率。中医强调辨证论治和整体调节人体功能,在冠心病治疗方面取得了良好疗效。导师王显教授根据多年临床实践经验,创新提出动脉粥样硬化“络风内动”学说,认为络风内动是冠心病发病的又一重要病机,其研发的络风宁1号方可用于冠心病心绞痛的治疗。2研究目的2.1应用系统评价方法评价祛风通络药物治疗冠心病的疗效和安全性。2.2采用分子生物学方法等手段检测冠脉血管内皮损伤相关调控分子的含量,探索络风宁1号方治疗冠心病的作用机理,探讨该方治疗冠脉血管损伤的具体作用环节。3研究方法3.1使用RevMan 5.1.0统计软件对祛风通络药物治疗冠心病的数据进行统计分析。3.2心肌梗死大鼠模型采用左冠状动脉结扎的方法制备,对所有造模大鼠采用心电图评价,并应用随机数字表将所有造模成功的大鼠随机分为假手术组、模型组、络风宁1号组、联合用药组、卡托普利组。术后第一天起,各组大鼠分别灌胃相应药物,每天两次,共灌胃4周。我们对4周后心肌梗死模型大鼠的心功能相关指标及心梗病变情况进行检测,评估心肌梗死模型大鼠的制作成功及络风宁1号方对心肌梗死模型大鼠治疗效果；通过检测心肌梗死模型大鼠心肌梗死边缘组织内皮细胞蛋白C受体(EPCR)、血栓调节蛋白(TM)的mRNA及蛋白表达水平、检测血清中sEPCR及sTM含量、血浆NO、 PGI2含量,探讨络风宁1号方对血管内皮抗凝功能的调控机制；检测心肌梗死边缘组织NF-kB阳性表达及VCAM-1、ICAM-1积分光密度值,探讨络风宁1号方对血管内皮损伤炎症物质的调控功能。4研究结果4.1本系统评价共纳入符合评价标准的随机对照试验(RCT)7篇,共478名患者,所纳入的RCT尚无高质量的研究。分析结果显示了祛风通络药治疗冠心病的疗效及安全性。与复方丹参滴丸比较,祛风通络药物可更好地提高心绞痛疗效(RR=1.31, 95%CI=1.06-1.64)、心电图疗效(RR=1.57,95%CI=1.18-2.11),其中一篇RCT报告了祛风通络药还可以更好地降低血栓素B2/6-酮前列腺素F1α比值(RR=-0.89,95%CI=-1.25--0.53),但对于中医证候疗效、血液流变学、血脂变化、C反应蛋白比较无统计学差异；与银杏叶片比较,祛风通络药可以更有效地高心绞痛疗效(RR=1.44,95%CI=1.04-2.00)、心电图疗效(RR=1.53,95%CI=1.02-2.31),中医证候疗效(RR=1.44,95%CI=1.04-2.00),但对于血脂变化无统计学差异；有3篇RCT报告了祛风通络药加常规西药对比常规西药,其中两篇报告了祛风通络药加常规西药可以更好地改善心绞痛疗效(RR=1.31,95%CI=1.07-1.60),两篇RCT报告了祛风通络药加常规西药较常规西药比,心电图疗效更显著(RR=1.44,95%CI=1.16-1.79),但对于血脂及炎症因子变化无统计学差异；祛风通络药物加常规西药对比通心络加常规西药,祛风通络药物可以更好地降低全血黏度高切值(MD=0.27,95%CI=0.05-0.49),但对于心绞痛疗效、心电图疗效、中医证候学疗效比较无统计学差异。在不良反应方面仅有3篇文献进行了报告,其中1篇报告无不良反应,其余两篇报告了服用药物后患者出现胃部不适、腹泻,祛风通络药与对照药在不良反应方面比较无统计学差异。4.2实验研究共包括三个部分实验一,成功建立SD大鼠心肌梗死模型,假手术组大鼠术前、术后7天心电图未有明显变化；造模组大鼠术后7天心电图肢导(I、aVL),胸导(V1-V6)均可见ST段逐渐回落同时出现病理性Q波,且病理性Q波除假手术组外各组间无统计学差异,说明了心肌梗死大鼠造模的一致性。络风宁1号可以改善大鼠心血瘀阻的症状,且络风宁1号方与卡托普利联合使用对于改善大鼠心血瘀阻症状方面可以起到协同增效的作用。我们对术后4周的实验大鼠进行二维超声心动图评价及脏体比值比较：与假手术组比较,模型组超声心动参数LVPWTd、LVPWTs、EF%、FS%均降低,除LVPWTd外均有统计学差异(P<0.01)；LVDs、LVDd、脏体比值增加,除LVDd外其余均有统计学差异(P<0.01)；络风宁1号组较模型组LVDd、LVPWTd、LVPWTs、EF%、FS%均升高但均无统计学差异,LVDs、脏体比值均降低,其中脏体比值有统计学差异(P<0.05)；络风宁1号组较卡托普利组LVDs、LVDd、脏体比值略增加,LVPWTd、LVPWTs、EF%、FS%降低,除脏体比值有统计学差异(P<0.05)其余均无统计学差异；术后4周各组大鼠心肌病理形态学观察显示络风宁1号组病理改变与模型组相似,较模型组梗死病变范围减小,但较卡托普利组梗死病变范围增大；联合用药组较模型组LVPWTd、LVPWTs、 EF%、FS%均升高,LVDs、LVDd、脏体比值均降低,其中LVPWTs有统计学差异(P<0.05)、脏体比值有显著统计学差异(P<0.01)；联合用药组与卡托普利组比较,LVDs、 LVDd增加、LVPWTd、LVPWTs略增加,EF%、FS%、脏体比值降低,但均无统计学差异。联合用药组病理改变与模型组相似,但梗死病变范围较模型组显著减小,较卡托普利组梗死病变范围减小。实验二,采用实时荧光定量RT-PCR、组织匀浆Western blot技术检测络风宁1号方对心梗梗死大鼠梗死边缘区组织EPCR、TM的mRNA和蛋白表达的影响,采用Elisa方法检测络风宁1号方对心肌梗死大鼠血清sEPCR、sTM水平影响。本实验结果表明,模型组大鼠梗死心肌边缘组织中EPCR、TM的mRNA含量较假手术组明显升高(P<0.01)、心肌梗死心肌边缘组织中EPCR、TM蛋白含量较假手术组明显减少(P<0.01或P<0.05)、血清中sEPCR、sTM含量较假手术组明显增多(P<0.01)；络风宁1号组大鼠梗死心肌边缘区组织EPCR、TM的mRNA含量较模型组下降(P<0.01)、较卡托普利组增加(P<0.01),络风宁1号组大鼠梗死心肌边缘组织EPCR, TM蛋白含量较模型组增加,其中EPCR蛋白含量有显著统计学差异(P<0.01)、TM蛋白含量无统计学差异,较卡托普利组下降,且均无统计学差异,络风宁1号组血清中sEPCR、sTM较模型组下降(P<0.01或P<0.05)、但较卡托普利组增加(P<0.01)；联合用药组大鼠心肌梗死边缘组织EPCR、TM的mRNA含量较模型组降低(P<0.01)、较卡托普利组降低但无统计学差异,联合用药组大鼠心肌梗死边缘组织EPCR、TM蛋白含量较模型组增加(P<0.01或P<0.05)、较卡托普利组增加但无统计学差异,联合用药组血清中sEPCR、sTM较模型组下降(P<0.01)、较卡托普利组下降但无统计学差异。采用硝酸还原酶法检测血浆NO及放射免疫法检测血浆PGI2含量,结果模型组大鼠血浆中NO、PGI2含量较假手术组明显减少(P<0.01),络风宁1号方组大鼠血浆中NO、PGI2较模型组增加,但无统计学差异、较卡托普利组下降,但无统计学差异；联合用药组大鼠血浆中NO、PGI2较模型组增加(P<0.01)、较卡托普利组增加,但无统计学差异；实验三,采用免疫组化方法检测大鼠心肌梗死边缘组织NF-kB阳性表达、VCAM-1、 ICAM-1积分光密度,结果显示,模型组心肌梗死边缘区组织NF-kB阳性表达、VCAM-1积分光密度高于假手术组(P<0.01), ICAM-1积分光密度高于假手术组但无统计学差异；络风宁1号组心肌梗死边缘区组织NF-kB阳性表达、VCAM-1积分光密度低于模型组(P<0.01或P<0.05),ICAM-1积分光密度低于模型组但无统计学差异,略高于卡托普利组但差异无统计学意义；联合用药组心肌梗死边缘区组织NF-kB阳性表达、VCAM-1积分光密度、ICAM-1积分光密度低于模型组,其中NF-kB阳性表达、VCAM-1积分光密度有显著统计学差异(P<0.01)、ICAM积分光密度无统计学差异,略低于卡托普利组且均无统计学差异。5结论5.1目前资料对于祛风通络药物治疗冠心病循证医学尚不充分,有限的资料表明祛风通络药物对减轻心绞痛症状、改善中医证候方面可能有一定疗效；5.2络风宁1号方能够改善心梗大鼠一般状况,但本实验未能观察到络风宁1号方对心梗大鼠心脏结构和功能的改善作用；5.3络风宁1号方能够减轻膜结合型EPCR、TM的损伤,抑制了EPCR、TM的mRNA代偿性增加,使sEPCR、sTM含量下降,上调心肌组织中EPCR、TM的蛋白表达,且络风宁1号方联合卡托普利具有协同增效的作用；5.4络风宁1号方可以显著降低心梗大鼠心肌梗死边缘组织NF-kB、VCAM-1的表达,并且络风宁1号方联合卡托普利具有协同增效的作用,但对于降低ICAM-1的表达并不显著。