高通量蛋白质芯片的制备及其Raman表征

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本文通过改变实验条件制备介孔尺寸可控介孔二氧化硅纳米颗粒(meso-SiO2),并且利用Langmiur-Blogget(LB)技术将介孔二氧化硅在玻片上进行组装,制备出一种新型的具有生物相容性的高固定率的蛋白质芯片玻璃载体。通过设计并实验制备两类拉曼探针:非标记拉曼探针(Ag@TiO2,SiO2@Ag)以及标记拉曼探针(SiO2@Au修饰MWNTs),利用表面增强拉曼散射技术(Surface Enhancement Raman Scattering,SERS)检测其高灵敏度。研究了以油水体系作为反应体系,CTAB作为表面活性剂,正硅酸四乙酯(TEOS)为硅源,苯乙烯为孔道模板,控制苯乙烯的聚合和正硅酸四乙酯的水解同时进行得到纳米介孔SiO2,介孔孔径在2-13 nm范围内可控。通过改变烷水比,可以制备出粒径尺寸在80-150 nm的范围内可控的纳米介孔SiO2。此种SiO2材料具有优良的性能,如高的比表面积、可控的孔尺寸和孔体积,是药物载体的理想材料。在不同pH条件下药物缓释实验中发现pH为1.2时,药物的释放速率最快,此外具有高的比表面积的介孔二氧化硅纳米颗粒,其盐酸多柔比星(DOX:Doxorubicin Hydrochloride)药物的载药量也增加,但是DOX药物的释放率却减小。累计药物释放实验中得出孔道尺寸决定了药物的释放量。利用LB技术将不同孔径的介孔SiO2在载玻片上进行组装,考察了其对蛋白的固定能力和结合能力。实验结果表明,介孔SiO2修饰蛋白质芯片固定蛋白能力强,固定率升高,结合蛋白能力也有所提高。经过优化实验蛋白质芯片信噪比可达1.58。并通过蛋白质反应性实验证明可知所制备出的芯片为活性蛋白质芯片。实验中设计并制备出两类结构新颖的纳米复合材料作为拉曼探针:非标记拉曼探针(Ag@TiO2,SiO2@Ag)以及标记拉曼探针(SiO2@Au修饰MWNTs)。以4-ATP作为拉曼信号表达物,通过表面增强拉曼散射技术,对三种拉曼探针表面增强拉曼散射效果进行研究,并得到其能检测的极限。结果显示,非标记性拉曼探针(Ag@TiO2)对4-ATP的检测极限高达到5×10-16 M,其拉曼增强因子约为2×104;非标记性拉曼探针(煅烧还原SiO2@Ag)对4-ATP的检测极限达到5×10-12 M,其拉曼增强因子约为3.7×102;而水合肼还原SiO2@Ag拉曼探针对4-ATP的检测极限达到5×10-14 M,其拉曼增强因子约为8.9×102
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