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目的研究血友病A患者的分子发病机制,以期在基因或表观遗传学层面找到新的基因缺陷类型或分子机制,从而进一步揭示其临床表现异质性的原因,为血友病A的治疗寻找新的切入点。方法随机抽取重庆地区已确诊血友病A患者24例,对所有病人通过当面询问、反复电话随访及病例资料回顾获取临床表型及实验室资料,取其血样用长距离PCR及双管多重PCR分别进行内含子1及内含子22倒位检测、高通量测序分析FⅧ基因全外显子突变情况、质谱甲基化检测方式进行启动子区Cp G岛甲基化情况分析(加入正常对照)。所有突变通过Pumbmed、UCSC、FactorⅧVariant Database检索明确是否为已报到突变或者是目前新发现突变,并结合倒位检测结果分析患者病情;而所选病例的甲基化检测结果则与正常对照组进行比较,寻找其表观遗传学修饰差异。结果1.24例病人年龄分布在2岁到48岁,多以关节出血为主要表现,其中重型13例(54.1%)、中间型9例(37.5%),中-重型1例(4.2%)(输注新鲜冰冻血浆后测FⅧ:C为8.6%),轻型1例(4.2%);所有病人临床表现与严重程度分型基本符合。2.因为标本采集后部分血样DNA浓度不足,24例标本共有18例进行了倒位检测,其中有7例检测出了22号内含子倒位,约占检测者中38.9%,未检测出1号内含子倒位患者。3.24例病人中FⅧ基因外显子测序有7例未检测出突变。余17例病人共检测出突变21个(15种),与Pumbmed、UCSC、FactorⅧVariant Database进行对比后发现有10种突变为新发现突变。4.对照组与所选择轻型及重型病例组对比,启动子区CpG岛甲基化程度在病例与对照之间或轻型及重型病例之间并无显著差异。结论血友病A患者以关节出血为主要表现,临床上重型较多见;其基因结构庞大,造成FⅧ基因重大改变的如倒位、终止突变等多导致重型临床表型,但其基因缺陷类型种类繁多,目前所检测到的缺陷类型不能完全解释血友病临床表现的异质性,且目前FⅧ基因启动子区CpG岛的甲基化检测暂不能支持其在血友病A的发病或病情严重程度中发挥作用,关于其分子发病机制还有待进一步探索。