巴卡亭Ⅲ转化生成10-DAB的微生物的筛选、鉴定和工艺优化

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10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)是合成紫杉烷类抗肿瘤药物的典型代表—多烯紫杉醇的重要原料。近年来,研究者发现巴卡亭Ⅲ经微生物转化反应后能够生成10-DAB,微生物转化具有反应选择性强、条件温和、环境污染少、反应速率快等优点,具有良好的应用前景。本论文以前期从泰达污水处理厂污泥中已分离得到的42个分离株为对象,以巴卡亭Ⅲ为底物,通过转化反应筛选能生成10-DAB的菌株,确定其种属信息。并对10-DAB生成率最高的菌株进行转化工艺优化。该工作为开发紫杉烷类化合物生物合成的途径提供新材料和新方法。取得的主要研究成果如下:(1)筛选得到13个具有转化巴卡亭Ⅲ生成10-DAB能力的分离株,生成率在0.40%-5.01%范围内波动,其中,分离株P2-A-8的10-DAB生成率最高,达到5.01%。(2)通过菌体形态学特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析相结合的方法,各菌株的鉴定结果分别为:P2-A-1被鉴定为甲苯单胞菌(Tolumonas osonensisa),P2-A-2被鉴定为鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii),P2-A-3被鉴定为大肠杆菌(Escherichia coli),P2-A-4 被鉴定为泛菌(Pantoea sp.),P2-A-5 被鉴定为嗜根考克氏菌(Kocuria rhizophila),P2-A-6 被鉴定为中间气单胞菌(Aeromonas media),P2-A-7被鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),P2-A-8被鉴定为成团泛菌(Pantoea agglomerans),P2-A-9 被鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),P2-A-10、P2-A-11、P2-A-12、P2-A-13 均被鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。其中,除了成团泛菌(Pantoea agglomerans)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是已报道的产10-DAB的微生物,其它菌株的转化巴卡亭Ⅲ生成10-DAB的能力均是首次报道。(3)以10-DAB生成率最高的成团泛菌P2-A-8为对象,采用响应面Box-Behnken试验对巴卡亭Ⅲ转化工艺进行优化。结果表明最佳转化条件为菌体培养时间12 h,菌体浓度OD600为3.0,投加底物浓度1.75 mg/mL,转化温度32℃,转化时间4d,此时10-DAB的生成率达24.5%,比优化前提高了 446.8%。
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